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【摘 要】 目的 建立用HPLC法测定盆炎净胶囊中原儿茶酸含量的方法。方法：色谱柱：SHIMADZU VP-ODS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（10：90）流速：1.0 ml· ；检测波长：256 nm，柱温30℃。结果：原儿茶酸在3.048 μg～76.20μg/ml范围内呈良好的线性关系（r=0.9998，n=5）。加样回收率为98.1%，RSD=0.9%（n=9）。结论：本方法操作简单、方便、准确，可用于盆炎净胶囊的质量控制。
【关键词】 盆炎净胶囊 原儿茶酸 高效液相色谱
【中图分类号】 R917 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）08-028-01
盆炎净胶囊具有清热利湿，和血通络，调经止带的功效，是由忍冬藤、蒲公英、鸡血藤、益母草、狗脊、车前草、赤芍、川芎共八味中药制成的胶囊，临床适用于治疗湿热下注，白带过多，盆腔炎等症状[1～2]。方中忍冬藤、蒲公英具有清热解毒和抗菌作用，原儿茶酸是其中有效成分，而现质量标准简单，对原儿茶酸没有检查项目，更未收载含量的测定，为了更好的控制其质量，笔者建立了盆炎净胶囊中原儿茶酸的含量测定。介绍如下。
1 仪器与试药
岛津 LC-20AT 泵，SPD-M20A检测器，SIL-20A自动进样器，LC-Solution色谱工作站；原儿茶酸对照品（中国食品药品检定研究院 批号：110809-201205），盆炎净胶囊由某企业提供，乙腈为色谱纯（Merck公司），其它试剂均为分析纯，水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为SHIMADZU VP-ODS C18（4.6mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（10：90），波長：256 nm，柱温30℃，进样量为10 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取原儿茶酸对照品19.05 mg置25ml棕色容量瓶中，加入一定量的50%甲醇超声10分钟，取出放冷，定容至刻度，得贮备液。精密吸取上述原儿茶酸贮备液1ml置50 ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
取供试品内容物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，滤液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
取缺忍冬藤、蒲公英的各原料药材适量，按制法制备阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 试验结果与讨论
2.3.1 最优试验条件
照上述色谱条件与试验条件，吸取对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液各10 μl，注入液相色谱，记录色谱图。原儿茶酸峰与其它组分峰分离良好，阴性对照无干扰，理论塔板数按原儿茶酸峰计算达到了5785。见图1。
A B C
A.原儿茶酸对照品 B.供试品 C.阴性对照
图1 盆炎净胶囊HPLC色谱图
2.3.2 线性关系考察
精密量取上述2.2.1的对照品贮备液0.1，0.5，1，1.5，2，2.5ml置于25 ml量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀。分别进样10 μl，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，以原儿茶酸进样量为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程：Y=36291X+17850 r=0.9998。结果表明，原儿茶酸在3.048 μg～76.20 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.3.3 精密度考察
照前述色谱条件与试验条件，吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，依法测定。峰面积的RSD为0.4%，表明仪器精密度良好
2.3.4 重复性试验
取同一批号样品溶液，精密量取5份，照供试品含量测定项下方法进行测定，RSD为 1.3%。
2.3.5 稳定性试验
精密吸取新配制的供试品溶液10 μl，在0，2，4，6，12 h进样，计算原儿茶酸的峰面积RSD为1.0%，结果表明原儿茶酸在12 h内稳定。
2.3.6 加样回收试验
精密称取已知含量的盆炎净胶囊样品9份（每份0.1g），分别加入1.5 ml，2.0 ml，2.5ml浓度为0.2926 mg/ml的原儿茶酸对照品溶液，照供试品溶液制备测定项下制备并测定，计算回收率，加样回收率为98.1%，RSD=0.9%（n=9）
2.3.7 溶剂考察
本实验根据原儿茶酸的性质，考察了超声提取、加热回流等方法，并对盆炎净胶囊相关文献报道中常见的70%乙醇和50%甲醇两种提取溶剂进行了考察，结果表明，以50%甲醇为溶剂提取效果更佳。
2.3.8 流动相的选择与检测波长的考察
实验过程中，比较了乙腈-0.1%磷酸与甲醇-0.1%磷酸在不同比例下的几种流动相[2～4]，最终确定了乙腈-0.1%磷酸（10：90）为流动相，盆炎净胶囊中原儿茶酸与其它成分峰以及杂质峰分离良好，理论塔板数大于5000。
采用岛津SPD-M20A检测器测定原儿茶酸对照品溶液与盆炎净胶囊的醇提取液，结果在256nm处均有最大吸收，因此选用256nm作为检测波长。
参考文献
[1]国家食品药品监督管理局标准[S].YBZ23722005
[2]陈叶青.RP-HPLC法测定盆炎净胶囊中绿原酸的含量[J].中国药师. 2010， 13（8）：1205-1206
[3]姜鸿，王光函，张颖，等.HPLC法测定火绒草中原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸和咖啡酸[J].中成药. 2011，33（11）：2023-2025
[4]陈晓鹏，鄂秀辉，夏忠庭，等.HPLC法同时定量测定养血清脑颗粒中7个主要成分[J].中成药. 2013，35（9）：1921-1924
【关键词】 盆炎净胶囊 原儿茶酸 高效液相色谱
【中图分类号】 R917 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）08-028-01
盆炎净胶囊具有清热利湿，和血通络，调经止带的功效，是由忍冬藤、蒲公英、鸡血藤、益母草、狗脊、车前草、赤芍、川芎共八味中药制成的胶囊，临床适用于治疗湿热下注，白带过多，盆腔炎等症状[1～2]。方中忍冬藤、蒲公英具有清热解毒和抗菌作用，原儿茶酸是其中有效成分，而现质量标准简单，对原儿茶酸没有检查项目，更未收载含量的测定，为了更好的控制其质量，笔者建立了盆炎净胶囊中原儿茶酸的含量测定。介绍如下。
1 仪器与试药
岛津 LC-20AT 泵，SPD-M20A检测器，SIL-20A自动进样器，LC-Solution色谱工作站；原儿茶酸对照品（中国食品药品检定研究院 批号：110809-201205），盆炎净胶囊由某企业提供，乙腈为色谱纯（Merck公司），其它试剂均为分析纯，水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为SHIMADZU VP-ODS C18（4.6mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（10：90），波長：256 nm，柱温30℃，进样量为10 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取原儿茶酸对照品19.05 mg置25ml棕色容量瓶中，加入一定量的50%甲醇超声10分钟，取出放冷，定容至刻度，得贮备液。精密吸取上述原儿茶酸贮备液1ml置50 ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
取供试品内容物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，滤液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
取缺忍冬藤、蒲公英的各原料药材适量，按制法制备阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 试验结果与讨论
2.3.1 最优试验条件
照上述色谱条件与试验条件，吸取对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液各10 μl，注入液相色谱，记录色谱图。原儿茶酸峰与其它组分峰分离良好，阴性对照无干扰，理论塔板数按原儿茶酸峰计算达到了5785。见图1。
A B C
A.原儿茶酸对照品 B.供试品 C.阴性对照
图1 盆炎净胶囊HPLC色谱图
2.3.2 线性关系考察
精密量取上述2.2.1的对照品贮备液0.1，0.5，1，1.5，2，2.5ml置于25 ml量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀。分别进样10 μl，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，以原儿茶酸进样量为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程：Y=36291X+17850 r=0.9998。结果表明，原儿茶酸在3.048 μg～76.20 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.3.3 精密度考察
照前述色谱条件与试验条件，吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，依法测定。峰面积的RSD为0.4%，表明仪器精密度良好
2.3.4 重复性试验
取同一批号样品溶液，精密量取5份，照供试品含量测定项下方法进行测定，RSD为 1.3%。
2.3.5 稳定性试验
精密吸取新配制的供试品溶液10 μl，在0，2，4，6，12 h进样，计算原儿茶酸的峰面积RSD为1.0%，结果表明原儿茶酸在12 h内稳定。
2.3.6 加样回收试验
精密称取已知含量的盆炎净胶囊样品9份（每份0.1g），分别加入1.5 ml，2.0 ml，2.5ml浓度为0.2926 mg/ml的原儿茶酸对照品溶液，照供试品溶液制备测定项下制备并测定，计算回收率，加样回收率为98.1%，RSD=0.9%（n=9）
2.3.7 溶剂考察
本实验根据原儿茶酸的性质，考察了超声提取、加热回流等方法，并对盆炎净胶囊相关文献报道中常见的70%乙醇和50%甲醇两种提取溶剂进行了考察，结果表明，以50%甲醇为溶剂提取效果更佳。
2.3.8 流动相的选择与检测波长的考察
实验过程中，比较了乙腈-0.1%磷酸与甲醇-0.1%磷酸在不同比例下的几种流动相[2～4]，最终确定了乙腈-0.1%磷酸（10：90）为流动相，盆炎净胶囊中原儿茶酸与其它成分峰以及杂质峰分离良好，理论塔板数大于5000。
采用岛津SPD-M20A检测器测定原儿茶酸对照品溶液与盆炎净胶囊的醇提取液，结果在256nm处均有最大吸收，因此选用256nm作为检测波长。
参考文献
[1]国家食品药品监督管理局标准[S].YBZ23722005
[2]陈叶青.RP-HPLC法测定盆炎净胶囊中绿原酸的含量[J].中国药师. 2010， 13（8）：1205-1206
[3]姜鸿，王光函，张颖，等.HPLC法测定火绒草中原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸和咖啡酸[J].中成药. 2011，33（11）：2023-2025
[4]陈晓鹏，鄂秀辉，夏忠庭，等.HPLC法同时定量测定养血清脑颗粒中7个主要成分[J].中成药. 2013，35（9）：1921-1924