一种平末端连接的有效方法

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转化效率与质粒大小成反比,而当质粒大于15kb时,转化效率将成为限制因素,此时提高连接效率极为必要,特别是对于具有普遍性而效率又低的平末端连接。我们在连接反应体系中,加入相应的产生平末端质粒载体的限制性内切酶HPaI、或EcoRV,与不加HPaI、或EcoRV的连接反应相对照,连接产物转化大肠杆菌JM109后,产生的转化子比率分别为19.9%和5.6%(PFP7),32.6%和9.7%(pFB175),24.3%和3.6%(pFH12),37.9%和10.3%(pFP26),且从转化株中分离的质#DNA经电泳、酶切鉴定为目的产物。HpaI、或EcoRV的存在极有利于插入片段连接到载体上,同时抑制载体自身环化或寡聚化,大大提高了平末端连接效率。
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