粉尘螨Derf5克隆表达、纯化和免疫原性鉴定

来源 :南昌大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：qq635306700

【摘要】

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目的克隆表达粉尘螨第5组变应原（dermatophagoides farinae，Derf5）基因，并鉴定纯化蛋白免疫原性。方法根据Derf5基因已知序列，设计出相应的引物，提取粉尘螨总RNA，采用RT-PCR方法扩增

【作者】

：

袁小惠高安健邬玉兰刘志刚

【机构】

：

深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所

【出处】

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南昌大学学报(医学版)

【发表日期】

：

2013年2期

【关键词】

：

粉尘螨 Der F5 蛋白表达纯化免疫印迹 dust mites Der f5 protein expression purification West

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目的克隆表达粉尘螨第5组变应原（dermatophagoides farinae，Derf5）基因，并鉴定纯化蛋白免疫原性。方法根据Derf5基因已知序列，设计出相应的引物，提取粉尘螨总RNA，采用RT-PCR方法扩增出Derf5基因片段，PCR产物克隆入pMDl8-T载体，转化大肠埃希菌Topl0，经PCR和酶切鉴定并测序。将上述所得阳性克隆菌株扩大培养，碱裂解法提取质粒，所得重组质粒pMDl8-T-Derf5和空质粒pET-32a同时用限制性内切酶BamHI与HindⅢ双酶切，经纯化后连接并转化至大肠

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