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目的
检测肝癌组织/正常组织样本以及肝癌细胞株中驱动蛋白家族成员21B(KIF21B)基因的差异表达及对细胞生物学行为的影响。
方法采用TCGA数据库筛查KIF21B基因的差异表达;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝癌细胞株中KIF21B基因的表达水平;构建靶向沉默KIF21B基因的短发夹RNA(shRNA),感染BEL-7404细胞,获得稳定沉默细胞株,检测转染后肝癌细胞中KIF21B的mRNA表达水平及蛋白表达水平变化;Celigo检测KIF21B基因消减对细胞增殖的影响;噻唑蓝(MTT)检测KIF21B基因消减对细胞增殖的影响;流式细胞荧光分选(FACS)检测KIF21B基因消减对细胞凋亡的影响;克隆形成实验检测KIF21B基因消减对细胞克隆形成能力的影响。计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验。
结果与正常组织比较,KIF21B基因在31份肝癌组织中表达上调,14份无变化,5份下调。KIF21B在4种肝癌细胞株表达水平高于正常肝组织细胞Chang Liver(P<0.05)。靶向KIF21B的shRNA可有效沉默KIF21B的表达,MTT法检测KIF21B消减后BEL-7404细胞实验组与未处理组的增长率(P<0.05)受到显著抑制;凋亡显著增加(P<0.05);克隆形成能力检测KIF21B细胞的克隆形成能力显著下降(25.3±3.7比418.2±26.5,P<0.05)。
结论沉默KIF21B基因后,肝癌细胞凋亡增加,增殖及克隆形成能力明显下降。