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目的
观察普罗布考对高糖环境下人视网膜Müller细胞中特化蛋白1 (SP1)/细胞骨架相关蛋白(Keap1 )/核因子E2相关因子2 (Nrf2 )/半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)表达的影响;初步探讨普罗布考的抗氧化作用。
方法体外培养的人Müller细胞分为正常糖组(5.5 mmol/L )、高糖组(25.0 mmol/L)、正常糖+普罗布考组、高糖+普罗布考组;后两组中加入100 μmol/L普罗布考。免疫荧光染色法鉴定Müller细胞;免疫荧光染色法和实时RP-PCR (qRT-PCR)检测各组Müller细胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白、mRNA的表达。两组间数据比较采用独立样本t检验。
结果体外培养的人Müller细胞谷氨酰胺合成酶染色阳性率>95%。免疫荧光染色结果显示,Müller细胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白均呈阳性表达。qRT-PCR结果显示,与正常糖组比较,高糖组Müller细胞中SP1 (t=28.30,P<0.000)、Keap1 (t=5.369,P=0.006 )、Nrf2 (t=10.59,P=0.001)mRNA表达显著上调,GCLC显著下调(t=4.633,P=0.010),差异均有统计学意义。与高糖组比较,高糖+普罗布考组Müller细胞中SP1 (t=12.60,P=0.000)、Keap1 (t=4.076,P=0.015 )mRNA表达显著下调,Nrf2 (t=12.90,P=0.000)、GCLC (t=15.96,P<0.000)mRNA表达显著上调,差异均有统计学意义。
结论普罗布考通过抑制高糖诱导Müller细胞中SP1、Keap1的表达,上调Müller细胞中Nrf2、GCLC的表达,发挥抗氧化作用。