论文部分内容阅读
目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶（DAAO）的新方法，以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸（GL-7ACA）。方法通过基因工程手段，构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒，电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞，利用PCR方法筛选阳性转化子，再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌（PHD12）摇瓶发酵单位达到2000IU／L，发酵罐内达到22500IU／L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化，以60％的总收率获得纯化