对传统的根癌农杆菌冻融法转化条件进行优化,研究了根癌农杆菌EHA105和LBA4404的菌株生长状态、CaCl₂浓度、质粒加入量、二甲基亚砜（DMSO）、聚乙二醇（PEG4000）对质粒pBI121-Ctube转化根癌农杆菌EHA105和LBA4404的影响。结果表明:EHA105比LBA4404更容易接受外源质粒,两株农杆菌在Ca²⁺浓度为0.06 mol/L时,感受态转化能力最佳。OD₆₀₀分别为0.5和0.4时,EHA105和LBA4404的转化效率较高。10μg的pBI121-Ctube质粒会降低转化率。低浓度的DMSO和PEG4000均可以提高转化率,浓度过高会抑制农杆菌转化甚至产生毒害作用。在初步优化的感受态细胞中,添加DMSO和PEG4000（4%）的EHA105和LBA4404感受态细胞,转化率比没有DMSO和PEG4000制备的最佳农杆菌感受态细胞转化效率增加了28.6和22.3倍（P<0.01）,结果表明该法比传统的优化效果更加有效。