【摘 要】
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目的 基于三七根转录组数据库，克隆三七皂苷合成关键酶细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）基因，对其进行生物信息学分析，明确其对丛枝菌根真菌（arbuscular mycorrhizal fungi,AMF）诱导的响应，为进一步研究其催化特性奠定基础。方法 基因PnCyp450＿3开放阅读框（open reading frame,ORF）克隆及克隆载体构建依据相应试剂盒说
【机 构】
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云南中医药大学中药学院暨云南省南药可持续利用重点实验室
【基金项目】
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中央本级重大增减支项目“名贵中药资源可持续利用能力建设项目”（2060302-2101-24）； 国家自然科学基金资助项目（82260743）； 云南省科技厅应用基础计划面上项目（202201AT070219,202001AT070109,2019FB122）； 云南省中医药应用基础研
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目的 基于三七根转录组数据库，克隆三七皂苷合成关键酶细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）基因，对其进行生物信息学分析，明确其对丛枝菌根真菌（arbuscular mycorrhizal fungi,AMF）诱导的响应，为进一步研究其催化特性奠定基础。方法 基因PnCyp450＿3开放阅读框（open reading frame,ORF）克隆及克隆载体构建依据相应试剂盒说明书，通过化学转化法及氨苄青霉素抗性标记筛选阳性克隆。利用各种在线工具或软件完成生物信息学分析及系统发育树构建；基因表达特性分析采用实时荧光定量（real-time fluorescence quantitative,qPCR）技术。结果 成功克隆了1个三七细胞色素P450超家族基因PnCyp450＿3，其ORF全长1617 bp，编码538个氨基酸，预测蛋白相对分子质量为59 690，等电点（pI）为8.50，含有5个保守结构域。组织表达特性结果显示，在主根、须根部位，PnCyp450＿3均可响应根内球囊霉（Glomus intraradices）的诱导而显著上调表达（P＜0.05），其中主根相对表达量最高（1.85倍），须根次之（1.22倍）。结论 PnCyp450＿3是一个编码538个氨基酸的CYP450超家族基因，在主根、须根中均可响应根内球囊霉的诱导而显著上调表达，为深入研究三七皂苷合成关键酶基因响应生物因子诱导的调控机制提供了数据支持，具有重要的参考价值。
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