利用内标为基础的RT-PCR技术检测葡萄茎痘伴随病毒

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选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体had5基因为内标,建立了GRSPaV与had5共扩增体系,将扩增的GRSPaV特异性片段及had5目的片段分别克隆测序,与NCBI中所提交的核酸序列进行比对,GRSPaV与序列号AF057136的同源性达96%;had5与序列号D37958的同源性达96.67%。
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