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摘要：目的，建立测定胸腺五肽制剂半成品含量的UPLC法并进行方法学验证。方法 色谱条件：以0.05mol/L的磷酸盐缓冲液PH：7.0-甲醇=（90：10）为流动相，等度洗脱：进样量为4ul，流速0.2ml/min，检测波长275nm.结果：在1ug-3ug范围内与主峰面积呈良好的线性关系（R=0.99996），空白溶剂对该法无干扰，重复性RSD=0.3%，中间精密度RSD=0.2%;溶液稳定性实验RSD=0.3%;不同加标量的平均回收率为100.13%;耐用性实验结果显示各条件检测结果RSD=1%以内，采用HPLC与UPLC对6批样品的含量测定进行对比，两法相对偏差均未超过0.5%，结论UPLC法快速、简便、准确性、专属性强。适用于胸腺五肽制剂半成品含量测定。
关键词：胸腺五肽制剂半成品;UPLC;含量
【中图分类号】R-02 【文献标识码】B 【文章编号】2107-2306（2020）02-297-02
引言
胸腺五肽适用于恶性肿瘤﹑急慢性肝炎﹑外科大手术及严重感染﹑自身免疫性疾病﹑年老体弱免疫功能低下的患者的辅助治疗，是比较安全有效的.目前国内采用HPLC测定其含量和有关物质，其方法检测时间长，化学试剂用量大，本文参照HPLC含量测定方法建立其UPLC含量测定法。
1材料
[样品与对照品] 胸腺五肽注射液（20190601、20190602、20190605）;注射用胸腺五肽（20190601、20190602、20190605），工作对照品（O1810026）.
[主要试剂及仪器]CQUITY UPLC –Class型超高效液相色谱仪。ACQ TUV 紫外检测器;Waters C18 2.1*50mm 1.7um色谱柱;磷酸二氢钾（成都市科隆化学品有限公司 批号：2018062201 分析纯） 氢氧化钠（成都市科隆化学品有限公司 批号：2018070201 分析純）甲醇（美国天地 批号：19025062 色谱纯）。
[色谱条件]以0.05mol/L的磷酸盐缓冲液PH：7.0-甲醇=（90：10）为流动相，等度洗脱;进样量为4ul，流速0.2ml/min，检测波长275nm，同时精密称取胸腺五肽对照品适量，加流动相溶解并制成每1 ml含主药0.5mg，精密量取4ul注入超高效液相色谱仪，理论板数按胸腺五肽峰计应不低于2000。
2.方法与结果
[系统适用性试验] 称取胸腺五肽对照品适量，加流动相溶解并制成每1 ml中含0.5mg胸腺五肽约0.5mg作为系统适用性溶液，实验结果显示RSD=0.2%，理论板数为3625。
[专属性]配制空白溶剂，空白辅料溶液 对照品溶液与供试品溶液，进行辅料干扰分析，结果显示，空白溶剂与空白辅料在该条件无吸收峰，对含量测定无干扰，方法专属性良好，结果见下表：
[线性试验] 配制浓度为0.5mg对照品溶液，分别精密量取2ul、3ul、4ul、5ul、 6ul 注入液相色谱仪，记录峰面积，以主峰峰面积为纵坐标，进样体积（ul） 为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=296469X-23302，相关系数r=0.99996，实验结果表明，在进样浓度为1ug-3ug范围内与主峰面积呈良好的线性关系.
[重复性与中间精密度试验] 结果显示重复性实验结果RSD=0.3%，中间精密度RSD=0.2%.
[准确度试验]在空白辅料中加入对照品制成加标对照品约为10.24mg/ml 12.59mg/ml 15.13mg/ml的溶液各三份，计算回收率， 回收率分别为：99.89% 、 100.07% 、 100.43%，平均回收率为：100.13 %..表明方法准确度高.
[溶液稳定性试验] 取供试品溶液于第0 、2 、4、 8 、12小时进样，进样5次，计算峰面积RSD，结果显示 RSD为0.3%，表明样品在溶解后在12小时内稳定性良好.
[耐用性实验]结果显示 RSD均在1.0%以内，表明当色谱柱、流速、柱温等条件微小变化时对含量测定结果无影响.
[UPLC法与HPLC法对比试验]6批样品的含量测定结果表明，相对偏差均未超过0.5%，该方法与HPLC法的测定结果一致性良好.
3.讨论.
UPLC分析方法是一种高效、快捷的检测方法，比HPLC法在检测时间上节省60% ，检出能力与HPLC法一致，方法验证结果表明，该法是一种准确，可靠的测定方法.
参考文献
【1】任仲辉 郭卫.胸腺五肽合成工艺的研究[J]黑龙江医药，2008，（05）：67-68
【2】 张玺炜 赵子仪.胸腺五肽配合化疗治疗中晚期恶性肿瘤[J]中外医疗，2008（22）：29+31
关键词：胸腺五肽制剂半成品;UPLC;含量
【中图分类号】R-02 【文献标识码】B 【文章编号】2107-2306（2020）02-297-02
引言
胸腺五肽适用于恶性肿瘤﹑急慢性肝炎﹑外科大手术及严重感染﹑自身免疫性疾病﹑年老体弱免疫功能低下的患者的辅助治疗，是比较安全有效的.目前国内采用HPLC测定其含量和有关物质，其方法检测时间长，化学试剂用量大，本文参照HPLC含量测定方法建立其UPLC含量测定法。
1材料
[样品与对照品] 胸腺五肽注射液（20190601、20190602、20190605）;注射用胸腺五肽（20190601、20190602、20190605），工作对照品（O1810026）.
[主要试剂及仪器]CQUITY UPLC –Class型超高效液相色谱仪。ACQ TUV 紫外检测器;Waters C18 2.1*50mm 1.7um色谱柱;磷酸二氢钾（成都市科隆化学品有限公司 批号：2018062201 分析纯） 氢氧化钠（成都市科隆化学品有限公司 批号：2018070201 分析純）甲醇（美国天地 批号：19025062 色谱纯）。
[色谱条件]以0.05mol/L的磷酸盐缓冲液PH：7.0-甲醇=（90：10）为流动相，等度洗脱;进样量为4ul，流速0.2ml/min，检测波长275nm，同时精密称取胸腺五肽对照品适量，加流动相溶解并制成每1 ml含主药0.5mg，精密量取4ul注入超高效液相色谱仪，理论板数按胸腺五肽峰计应不低于2000。
2.方法与结果
[系统适用性试验] 称取胸腺五肽对照品适量，加流动相溶解并制成每1 ml中含0.5mg胸腺五肽约0.5mg作为系统适用性溶液，实验结果显示RSD=0.2%，理论板数为3625。
[专属性]配制空白溶剂，空白辅料溶液 对照品溶液与供试品溶液，进行辅料干扰分析，结果显示，空白溶剂与空白辅料在该条件无吸收峰，对含量测定无干扰，方法专属性良好，结果见下表：
[线性试验] 配制浓度为0.5mg对照品溶液，分别精密量取2ul、3ul、4ul、5ul、 6ul 注入液相色谱仪，记录峰面积，以主峰峰面积为纵坐标，进样体积（ul） 为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=296469X-23302，相关系数r=0.99996，实验结果表明，在进样浓度为1ug-3ug范围内与主峰面积呈良好的线性关系.
[重复性与中间精密度试验] 结果显示重复性实验结果RSD=0.3%，中间精密度RSD=0.2%.
[准确度试验]在空白辅料中加入对照品制成加标对照品约为10.24mg/ml 12.59mg/ml 15.13mg/ml的溶液各三份，计算回收率， 回收率分别为：99.89% 、 100.07% 、 100.43%，平均回收率为：100.13 %..表明方法准确度高.
[溶液稳定性试验] 取供试品溶液于第0 、2 、4、 8 、12小时进样，进样5次，计算峰面积RSD，结果显示 RSD为0.3%，表明样品在溶解后在12小时内稳定性良好.
[耐用性实验]结果显示 RSD均在1.0%以内，表明当色谱柱、流速、柱温等条件微小变化时对含量测定结果无影响.
[UPLC法与HPLC法对比试验]6批样品的含量测定结果表明，相对偏差均未超过0.5%，该方法与HPLC法的测定结果一致性良好.
3.讨论.
UPLC分析方法是一种高效、快捷的检测方法，比HPLC法在检测时间上节省60% ，检出能力与HPLC法一致，方法验证结果表明，该法是一种准确，可靠的测定方法.
参考文献
【1】任仲辉 郭卫.胸腺五肽合成工艺的研究[J]黑龙江医药，2008，（05）：67-68
【2】 张玺炜 赵子仪.胸腺五肽配合化疗治疗中晚期恶性肿瘤[J]中外医疗，2008（22）：29+31