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西尼罗病毒可引起人畜共患虫媒病,已经在全球许多国家流行.主要随迁飞的鸟类携带扩散,传入我国的风险很大.本研究在参考多株西尼罗病毒基因序列的基础上,设计引物及探针,建立了实时荧光RT-PCR的方法.特异性试验表明,该方法对同为黄病毒科的日本脑炎病毒(JEV) SA14-14-2株和登革病毒(DEN)Ⅰ型cDNA检测均为阴性;敏感性试验证实,实时RT-PCR检测敏感度要比常规RT-PCR法高100倍.说明本研究建立的实时RT-PCR方法敏感性和特异性均较高,可用于西尼罗病毒感染的早期监测和诊断.