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（1.烟台市牟平区姜格庄街道畜牧兽医工作站，山东 烟台 264114；2.青岛润达生物科技有限公司，山东 青岛 266200）
摘 要：为了解山东地区鸡沙门氏菌的流行及耐药情况，本文对山东部分市县的病死鸡只进行沙门氏菌的分离培养鉴定，最终得到12株致病性沙门氏菌菌种，并对分离菌株进行耐药性试验，结果鉴定12株沙门氏菌对沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素等均产生了一定的耐药性，对润达炎迪克、硫酸粘菌素、呼治常安和强力霉素有一定的敏感性。
关键词：沙门氏菌；分离；药敏试验
中图分类号：S858.314.4+3 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2017）04-0051-03
沙门氏菌是肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于环境或寄居于人和动物肠道内，绝大多数对人和动物具有致病性。鸡源沙门氏菌是鸡场的重要病原菌，可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒[1]，其典型症状为脾脏或肝脏表面密布黄白色坏死灶，心脏出现心肌炎症状，部分肠道或肺脏长有白色肉芽。鸡源沙门氏菌在鸡群中能垂直感染，被感染成鸡生长性能或产蛋下降，雏鸡大批死亡，死亡率高达80%，已成为危害养禽业的首要传染病之一[2]。感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒，人畜感染后它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。沙门氏菌不但会对畜牧业生产造成严重的经济损失，而且会严重威胁人类的健康，沙门氏菌病已成为一种常见多发的人畜共患病[3]。
对山东部分养鸡场的鸡源沙门氏菌病的流行情况进行调查，发现沙门氏菌广泛存在于鸡场中，由于沙门氏菌可以通过生殖道污染禽蛋，造成种蛋的孵化率降低和污染以及鸡只的大规模发病和死亡，引起严重的经济损失，极大困扰着养禽业的发展[4]。此外，滥用抗菌药物造成耐药菌株不断产生，致使该病的治疗越来越困难，给养鸡业造成了严重的经济损失。在这种背景下，快速、准确地检出病原体和体外药敏分析结果就成为必要。本文从病死鸡中分离培养沙门氏菌，用纸片法对分离菌株进行药物的敏感性研究，分析鸡源沙门氏菌对各类药物的敏感性情况，为当前流行的鸡源沙门氏菌的合理用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 培养基 营养琼脂培养基，SS琼脂培养基，肉汤培养基，三糖铁培养基，蛋白胨水培养基，赖氨酸铁琼脂培养基。
1.1.2 菌株 试验菌株来自山东部分市县养鸡场的病死鸡只，分离自病鸡内脏，共12株。
1.1.3 药敏纸片 硫酸安普霉素（Apramycin Sulfate），硫酸新霉素（Neomycin Sulphate），氟苯尼考（Florfenicol），强力霉素（Doxy），替米考星（Tilmicosin），阿米卡星（Amikacin），林可霉素（Lincomycin），阿莫西林（Amoxicillin），硫酸黏菌素（Colistin Sulfate），磷霉素钠（Fosfomvcin Sodium），头孢噻肟钠（Claforan）（注：以上药敏片均购自杭州滨和生物试剂有限公司），呼治常安，润达炎迪克（注：以上二种药敏片为实验室自制）。
1.2 试验方法
1.2.1 鸡源沙门氏菌的分离试验 将病料肝脏组织无菌条件下接种于普通琼脂和SS琼脂培养基，37℃培养18～24h。
1.2.2 鸡源沙门氏菌的鉴定试验 将分离到疑似沙门氏菌的菌株进行编号，按常规方法进行三糖铁试验、尿素酶试验、靛基质（吲哚）试验和赖氨酸脱羧酶试验。结果见表1。
1.2.2.1 将被检菌穿刺接种三糖铁琼脂，36±1℃培养18～24h后，观察结果。
1.2.2.2 将被检菌接种到尿素酶肉汤中，于36±1℃培养18～24h，观察结果。变红色为阳性，不变色或者变黄色为阴性。
1.2.2.3 将被检菌接种到蛋白胨水培养基中，36±1℃培养18～24h后，沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果。
1.2.2.4 将被检菌接种到赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化管中，于36±1℃培养18～24h后，观察结果。赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照均变黄为阴性，赖氨酸脱羧酶肉汤变紫，氨基酸脱羧酶对照变黄为阳性。
1.2.3 鸡源沙门氏菌的药敏试验 采用世界卫生组织（WHO）推荐的Kirby-Bauer纸片法进行耐药沙门氏菌对抗菌药物的敏感性测定。用灭菌棒将LB培养物涂抹于LB琼脂平板，将药敏纸片贴压于该平板上，然后37℃培养24h，观察结果。判定标准：抑菌圈直径>15mm为高度敏感；10mm<抑菌圈直径<15mm为中度敏感；抑菌圈直径<10mm为低度敏感；无抑菌圈为不敏感。结果见表2。
2 结果
2.1 鸡源沙门氏菌的分离鉴定结果
2.1.1 培养特性 将病料接种普通琼脂和SS琼脂培养基，37℃培养18～24h，在普通琼脂平板，形成均一、无色、半透明、表面光滑、隆起、边缘整齐的针尖大小的菌落，在SS 琼脂培养基上呈灰色、圆形、中心带黑色的可疑菌落，染色镜检挑取单个菌落进行革兰氏染色，在光学显微镜下观察细菌的形态及染色特点，呈现革兰氏阴性、无芽孢的中等大小杆菌。
以上结果符合沙门氏菌的生长特性。
2.1.2 生化鑒定结果 ①三糖铁试验：沙门氏菌反应为：斜面产碱，底层产酸，产H2S；②尿素酶试验：沙门氏菌反应为阴性；③靛基质（吲哚）试验：沙门氏菌反应为阴性；④赖氨酸脱羧酶试验：沙门氏菌反应为阳性。
结合以上结果，确定12株菌种均为沙门氏菌。
2.2 沙门氏菌的药物敏感性试验 采用世界卫生组织（WHO）推荐的Kirby-Bauer纸片法进行敏感性测定。测试沙门氏菌对硫酸安普霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考、强力霉素、替米考星、阿米卡星、林可霉素、阿莫西林、硫酸黏菌素、磷霉素钠、头孢噻肟钠、呼治常安、润达炎迪克的敏感性。
根据试验结果分析可知：分离得到的12株沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素的敏感率为0，说明沙门氏菌对这三种药的耐药性高，呈现多重耐药；沙门氏菌分离株对润达炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和强力霉素的敏感率高达80%以上，以上这几种药可作为临床用药。
3 讨论
3.1 根据试验结果，沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素的耐药性高，对润达炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和强力霉素的敏感率高。在科学用药的前提下，今后相当长的时间内，防治鸡源沙门氏菌病可首选阿米卡星、头孢噻肟、强力霉素、硫酸黏菌素、润达炎迪克、呼治常安等，应通过药敏试验来选择使用。
3.2 临床上用药时要注意交替用药，以免沙门氏菌形成抗药性，合理科学地使用抗生素，减少不必要的抗生素滥用。为了避免因抗药性影响治疗，在进行药物治疗之前，需对分离的细菌做药敏试验，从中选出最有效的药物进行治疗与预防。
3.3 在使用药物治疗的同时，对鸡舍应进行严格消毒，保证鸡舍卫生，加强饲养管理，温度、湿度、通风、光照应严格控制。在禽蛋、雏鸡的选择上应择优选择。
参考文献：
[1] 张步娴，李凤梅，胡杰，等.鸡源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性检测[J]. 农业与技术，2014（08）：176-178.
[2] 周廷宣.后备种鸡血清中沙门氏菌病抗体的检测[J].中国畜牧兽医，2007（09）：87-88.
[3] 王贵升，田夫林，陈静，等.山东省小规模养鸡场沙门氏菌流行病学调查分析[J].家禽科学，2007（05）：11-13.
[4] 赵贵，张华. 畜产品中沙门氏菌的危害及检测方法概述[J].贵州畜牧兽医，2004（03）：21-22.
收稿日期：2017-03-14
摘 要：为了解山东地区鸡沙门氏菌的流行及耐药情况，本文对山东部分市县的病死鸡只进行沙门氏菌的分离培养鉴定，最终得到12株致病性沙门氏菌菌种，并对分离菌株进行耐药性试验，结果鉴定12株沙门氏菌对沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素等均产生了一定的耐药性，对润达炎迪克、硫酸粘菌素、呼治常安和强力霉素有一定的敏感性。
关键词：沙门氏菌；分离；药敏试验
中图分类号：S858.314.4+3 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2017）04-0051-03
沙门氏菌是肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于环境或寄居于人和动物肠道内，绝大多数对人和动物具有致病性。鸡源沙门氏菌是鸡场的重要病原菌，可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒[1]，其典型症状为脾脏或肝脏表面密布黄白色坏死灶，心脏出现心肌炎症状，部分肠道或肺脏长有白色肉芽。鸡源沙门氏菌在鸡群中能垂直感染，被感染成鸡生长性能或产蛋下降，雏鸡大批死亡，死亡率高达80%，已成为危害养禽业的首要传染病之一[2]。感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒，人畜感染后它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。沙门氏菌不但会对畜牧业生产造成严重的经济损失，而且会严重威胁人类的健康，沙门氏菌病已成为一种常见多发的人畜共患病[3]。
对山东部分养鸡场的鸡源沙门氏菌病的流行情况进行调查，发现沙门氏菌广泛存在于鸡场中，由于沙门氏菌可以通过生殖道污染禽蛋，造成种蛋的孵化率降低和污染以及鸡只的大规模发病和死亡，引起严重的经济损失，极大困扰着养禽业的发展[4]。此外，滥用抗菌药物造成耐药菌株不断产生，致使该病的治疗越来越困难，给养鸡业造成了严重的经济损失。在这种背景下，快速、准确地检出病原体和体外药敏分析结果就成为必要。本文从病死鸡中分离培养沙门氏菌，用纸片法对分离菌株进行药物的敏感性研究，分析鸡源沙门氏菌对各类药物的敏感性情况，为当前流行的鸡源沙门氏菌的合理用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 培养基 营养琼脂培养基，SS琼脂培养基，肉汤培养基，三糖铁培养基，蛋白胨水培养基，赖氨酸铁琼脂培养基。
1.1.2 菌株 试验菌株来自山东部分市县养鸡场的病死鸡只，分离自病鸡内脏，共12株。
1.1.3 药敏纸片 硫酸安普霉素（Apramycin Sulfate），硫酸新霉素（Neomycin Sulphate），氟苯尼考（Florfenicol），强力霉素（Doxy），替米考星（Tilmicosin），阿米卡星（Amikacin），林可霉素（Lincomycin），阿莫西林（Amoxicillin），硫酸黏菌素（Colistin Sulfate），磷霉素钠（Fosfomvcin Sodium），头孢噻肟钠（Claforan）（注：以上药敏片均购自杭州滨和生物试剂有限公司），呼治常安，润达炎迪克（注：以上二种药敏片为实验室自制）。
1.2 试验方法
1.2.1 鸡源沙门氏菌的分离试验 将病料肝脏组织无菌条件下接种于普通琼脂和SS琼脂培养基，37℃培养18～24h。
1.2.2 鸡源沙门氏菌的鉴定试验 将分离到疑似沙门氏菌的菌株进行编号，按常规方法进行三糖铁试验、尿素酶试验、靛基质（吲哚）试验和赖氨酸脱羧酶试验。结果见表1。
1.2.2.1 将被检菌穿刺接种三糖铁琼脂，36±1℃培养18～24h后，观察结果。
1.2.2.2 将被检菌接种到尿素酶肉汤中，于36±1℃培养18～24h，观察结果。变红色为阳性，不变色或者变黄色为阴性。
1.2.2.3 将被检菌接种到蛋白胨水培养基中，36±1℃培养18～24h后，沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果。
1.2.2.4 将被检菌接种到赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化管中，于36±1℃培养18～24h后，观察结果。赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照均变黄为阴性，赖氨酸脱羧酶肉汤变紫，氨基酸脱羧酶对照变黄为阳性。
1.2.3 鸡源沙门氏菌的药敏试验 采用世界卫生组织（WHO）推荐的Kirby-Bauer纸片法进行耐药沙门氏菌对抗菌药物的敏感性测定。用灭菌棒将LB培养物涂抹于LB琼脂平板，将药敏纸片贴压于该平板上，然后37℃培养24h，观察结果。判定标准：抑菌圈直径>15mm为高度敏感；10mm<抑菌圈直径<15mm为中度敏感；抑菌圈直径<10mm为低度敏感；无抑菌圈为不敏感。结果见表2。
2 结果
2.1 鸡源沙门氏菌的分离鉴定结果
2.1.1 培养特性 将病料接种普通琼脂和SS琼脂培养基，37℃培养18～24h，在普通琼脂平板，形成均一、无色、半透明、表面光滑、隆起、边缘整齐的针尖大小的菌落，在SS 琼脂培养基上呈灰色、圆形、中心带黑色的可疑菌落，染色镜检挑取单个菌落进行革兰氏染色，在光学显微镜下观察细菌的形态及染色特点，呈现革兰氏阴性、无芽孢的中等大小杆菌。
以上结果符合沙门氏菌的生长特性。
2.1.2 生化鑒定结果 ①三糖铁试验：沙门氏菌反应为：斜面产碱，底层产酸，产H2S；②尿素酶试验：沙门氏菌反应为阴性；③靛基质（吲哚）试验：沙门氏菌反应为阴性；④赖氨酸脱羧酶试验：沙门氏菌反应为阳性。
结合以上结果，确定12株菌种均为沙门氏菌。
2.2 沙门氏菌的药物敏感性试验 采用世界卫生组织（WHO）推荐的Kirby-Bauer纸片法进行敏感性测定。测试沙门氏菌对硫酸安普霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考、强力霉素、替米考星、阿米卡星、林可霉素、阿莫西林、硫酸黏菌素、磷霉素钠、头孢噻肟钠、呼治常安、润达炎迪克的敏感性。
根据试验结果分析可知：分离得到的12株沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素的敏感率为0，说明沙门氏菌对这三种药的耐药性高，呈现多重耐药；沙门氏菌分离株对润达炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和强力霉素的敏感率高达80%以上，以上这几种药可作为临床用药。
3 讨论
3.1 根据试验结果，沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素的耐药性高，对润达炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和强力霉素的敏感率高。在科学用药的前提下，今后相当长的时间内，防治鸡源沙门氏菌病可首选阿米卡星、头孢噻肟、强力霉素、硫酸黏菌素、润达炎迪克、呼治常安等，应通过药敏试验来选择使用。
3.2 临床上用药时要注意交替用药，以免沙门氏菌形成抗药性，合理科学地使用抗生素，减少不必要的抗生素滥用。为了避免因抗药性影响治疗，在进行药物治疗之前，需对分离的细菌做药敏试验，从中选出最有效的药物进行治疗与预防。
3.3 在使用药物治疗的同时，对鸡舍应进行严格消毒，保证鸡舍卫生，加强饲养管理，温度、湿度、通风、光照应严格控制。在禽蛋、雏鸡的选择上应择优选择。
参考文献：
[1] 张步娴，李凤梅，胡杰，等.鸡源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性检测[J]. 农业与技术，2014（08）：176-178.
[2] 周廷宣.后备种鸡血清中沙门氏菌病抗体的检测[J].中国畜牧兽医，2007（09）：87-88.
[3] 王贵升，田夫林，陈静，等.山东省小规模养鸡场沙门氏菌流行病学调查分析[J].家禽科学，2007（05）：11-13.
[4] 赵贵，张华. 畜产品中沙门氏菌的危害及检测方法概述[J].贵州畜牧兽医，2004（03）：21-22.
收稿日期：2017-03-14