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【摘 要】对穇子水提物抗氧化性能进行研究。采用水杨酸法、DPPH·法，测定穇子水提物对羟基自由基、DPPH·自由基的清除能力。结果表明： 穇子水提物对DPPH·自由基、羟基自由基均具有一定的清除能力，在实验所选浓度范围内，清除DPPH·自由基、羟基自由基能力随浓度增加而增强，说明穇子水提物是一种天然有效的抗氧化剂。
【关键词】穇子；水提物；抗氧化性
穇子（Eleusine coracana（L） Gaertn）为禾本科（Gramineae）穇属（Eleusine）植物，又称龙爪粟、鸭爪稗、龙爪稷、鸡爪粟、云南稗、雁爪稗、鸭距粟、野粟，主要分布于东半球热带及亚热带地区，我国长江以南及安徽、河南、陕西、西藏、湖南、广西等省区有栽培。其主要功效为补中益气，主治胃疾病。研究表明，每1g穇子粉末中含胰蛋白酶抑制物103.50u，几乎没有糜蛋白酶抑制物，枯草杆菌蛋白酶抑制物对细菌蛋白酶抑制作用强于对牛胰、糜蛋白酶的作用。以穇子代替米做大鼠饲料，可促进体生长，并使其肝中脂肪含量增高[1]。目前，国内外对穇子的药用价值研究较少，本文初步探讨了穇子水提物的抗氧化功效，为其在医药、食品和化妆品领域的应用提供了理论依据。
1.材料与方法
1.1材料和仪器
1.1.1材料
穇子干品（购于广西宜州市农贸市场）；1，1-二苯基-2-苦基苯肼 （1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl， DPPH·） 为sigma公司分装。无水乙醇、FeSO4、H2O2均为分析纯。
1.1.2仪器
UV-2501 紫外分光光度计：日本岛津；AR224CN型电子分析天平：奥豪斯仪器有型公司；FW100型高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；HH-2数显恒温水浴锅：国华电器有限公司。
1.2 方法
药物制备：穇子干品粉碎过40目筛，称取3.000g，于500ml锥形瓶中，加入蒸馏水450ml，1000C水浴锅中，浸提45min。浸提完毕趁热抽滤，将滤液移入500ml容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2-3次，合并滤液倒入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水定容，摇匀。供测定用。
1.3 抗氧化试验
1.3.1有机自由基（DPPH·）清除能力测定方法[2]
将DPPH颗粒与少量无水乙醇混合，充分搅拌溶解，再以50%乙醇为溶剂，配制成0.05 mmol/L溶液。配制浓度为6.0、5.0、4.0、3.0、2.0 mg/mL 的药液，在最大波长处（测定最适波长为524nm），于直径1cm比色皿中，分别加入 0.5ml供试液，静置20min，测定各吸光度。每一吸光度平行测3次，取其平均值。以50%乙醇代替样品作为空白对照，吸光度为A0，以50%乙醇代替DPPH自由基溶液作为样底管，吸光度为 B，DPPH自由基清除能力测定计算公式如下：
清除率%=[1-（A-B） /A0]×100%
1.3.2羟基自由基清除能力测定方法[3]
在试管中依次加入6mmol/L 的硫酸亚铁1 mL，6 mmol/L 的水杨酸-乙醇溶液1 mL，分别加入1 mL 供试液（浓度为6.0、5.0、4.0、3.0、2.0 mg/mL 的药液），混匀后后加入0.1% 的H2O2溶液1 mL，以蒸馏水补足至总体积5 mL。其中对照管以1 mL蒸馏水代替样液，样底管以乙醇代替水杨酸溶液，摇匀后37 ℃水浴0.5h，离心，510 nm 处测定吸光值。清除率计算公式如下：
清除率（ %）=[1-（ A1-A2） /A0]×100%
2.结果与讨论
2.1对有机自由基（DPPH·）清除能力测定结果
DPPH·是一种很稳定的以氮为中心的自由基，在517nm处有强吸收峰，通常被用来检测抗氧化剂的抗氧化活性。当有自由基清除剂存在时，DPPH·会和清除剂提供的质子结合形成DPPH-H，引起A5l7nm降低，吸光值降低幅度越大则自由基清除率越高[4]。穇子对DPPH·的清除效果见图1，结果显示穇子DPPH·有较强的清除能力。且清除率呈现较好的量效关系。浓度为2.0mg/mL至6.0mg/mL时，对DPPH·的，清除率為21.86%至76.12%。
2.2羟基自由基清除能力测定结果
在活性氧中羟自由基化学性质最活泼，反应性极强，寿命很短，是己知的最强的氧化剂，几乎能和所有的细胞成分发生反应，如和蛋白质、核酸发生反应从而损伤生物体。这些损伤能引起衰老、癌症等多种疾病，因此清除·OH是对抗疾病的有效手段之一[5]。由图2可知，穇子对·OH有清除能力。且清除率呈现较好的量效关系，浓度为2mg/ml至6mg/ml之间对·OH清除率为9.83%至37.43%。
3.结论
通过检测生物试剂对DPPH·自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱[6]，因为DPPH·是一种稳定的有机自由基。根据DPPH·具有单电子在517nm处有呈深紫色的强吸收[7-8]，因此当有自由基清除剂存在时，与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数成定量关系，因而可用分光光度法进行定量分析[9]。该方法快速、简单、灵敏、直接，所以经常被用来筛选天然抗氧化剂。自由基的种类繁多，对生物机体危害最大的是羟自由基，机体中线粒体产生的·02-最终也常以·OH形式存在，故实验室中检测抗氧化物质对自由基的清除能力时常用清除的·OH和·02-能力作为衡量指标[10]。实验结果表明，穇子对DPPH·、·OH均有清除能力，且呈现较好的量效关系，在浓度2.0mg/mL至6.0mg/mL时，对DPPH·的清除率为21.86%至76.12%，对·OH清除率为9.83%至37.43%。鉴于自由基中DPPH·、·OH对生物机体危害较大，而穇子具有良好的清除DPPH·、·OH活性，故穇子作为天然抗氧化剂开发潜力极大。 参考文献：
[1]中华本草[M].上海科技出版社，2000，8.344-345.
[2]郭爽.四种抗氧化剂的活性研究及测定总抗氧化能新法初探[D].河南：河南农业大学硕士学位，2005.
[3] K.T.Tang， L. N. Liang， Y.Q.Cai，et al.Determination of sugars and sugar alcohols in tobacco feed liquids by high performance anion exchange and pulsed amperometric detection. Chin J Anal Chem，2007，35：1274-1278.
[4] C.H.Jung， H.M.Seog，I.W. Choi，et al.Antioxidant activities of cultivated and wild Korean ginseng leaves[J].Food Chemistry，2005，92： 535-540.
[5]G. Kaur， Z. Jabbar， M. Athar， et al.Punica granatum （pomegranate） flower extract possesses Potent antioxidant activity and abrogates Fe-NTA induced hepatotoxicity in mice[J].Food and Chemical Toxieology，2006，44：984-993.
[6]Y. Lu， L. Y. Foo. Identification and quantification of major polyphenol in apple pomace [J].Food Chemistry，1997，59： 187-194.
[7]叶勇.植物天然抗氧化成分及其效果[J].中国食品添加剂，2000，（4）：45-48.
[8]杜玉，娄红祥.天然植物抗氧化剂的作用机制研究概况[J].中药材，2006，29（7）：739-743.
[9]M. Bergman， T. Vzrshavskyl，I. H. Gottl.The antioxidant activity of aqueous spinach extraet： chemical identification of active fractions[J].Phytochemistry，2001，58（l）：143-152.
[10]賈秀月，高艳华，赵晓莲等.自由基与抗衰老的研究概况[J].黑龙江医药科学，2007，30（2）：75-76.
作者简介：
罗泽萍（1987-），女，助教，硕士，研究方向：生化药理学。
潘立卫（1987-），男，壮族，实验员，硕士，研究方向：中草药有效成分研究。
【关键词】穇子；水提物；抗氧化性
穇子（Eleusine coracana（L） Gaertn）为禾本科（Gramineae）穇属（Eleusine）植物，又称龙爪粟、鸭爪稗、龙爪稷、鸡爪粟、云南稗、雁爪稗、鸭距粟、野粟，主要分布于东半球热带及亚热带地区，我国长江以南及安徽、河南、陕西、西藏、湖南、广西等省区有栽培。其主要功效为补中益气，主治胃疾病。研究表明，每1g穇子粉末中含胰蛋白酶抑制物103.50u，几乎没有糜蛋白酶抑制物，枯草杆菌蛋白酶抑制物对细菌蛋白酶抑制作用强于对牛胰、糜蛋白酶的作用。以穇子代替米做大鼠饲料，可促进体生长，并使其肝中脂肪含量增高[1]。目前，国内外对穇子的药用价值研究较少，本文初步探讨了穇子水提物的抗氧化功效，为其在医药、食品和化妆品领域的应用提供了理论依据。
1.材料与方法
1.1材料和仪器
1.1.1材料
穇子干品（购于广西宜州市农贸市场）；1，1-二苯基-2-苦基苯肼 （1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl， DPPH·） 为sigma公司分装。无水乙醇、FeSO4、H2O2均为分析纯。
1.1.2仪器
UV-2501 紫外分光光度计：日本岛津；AR224CN型电子分析天平：奥豪斯仪器有型公司；FW100型高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；HH-2数显恒温水浴锅：国华电器有限公司。
1.2 方法
药物制备：穇子干品粉碎过40目筛，称取3.000g，于500ml锥形瓶中，加入蒸馏水450ml，1000C水浴锅中，浸提45min。浸提完毕趁热抽滤，将滤液移入500ml容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2-3次，合并滤液倒入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水定容，摇匀。供测定用。
1.3 抗氧化试验
1.3.1有机自由基（DPPH·）清除能力测定方法[2]
将DPPH颗粒与少量无水乙醇混合，充分搅拌溶解，再以50%乙醇为溶剂，配制成0.05 mmol/L溶液。配制浓度为6.0、5.0、4.0、3.0、2.0 mg/mL 的药液，在最大波长处（测定最适波长为524nm），于直径1cm比色皿中，分别加入 0.5ml供试液，静置20min，测定各吸光度。每一吸光度平行测3次，取其平均值。以50%乙醇代替样品作为空白对照，吸光度为A0，以50%乙醇代替DPPH自由基溶液作为样底管，吸光度为 B，DPPH自由基清除能力测定计算公式如下：
清除率%=[1-（A-B） /A0]×100%
1.3.2羟基自由基清除能力测定方法[3]
在试管中依次加入6mmol/L 的硫酸亚铁1 mL，6 mmol/L 的水杨酸-乙醇溶液1 mL，分别加入1 mL 供试液（浓度为6.0、5.0、4.0、3.0、2.0 mg/mL 的药液），混匀后后加入0.1% 的H2O2溶液1 mL，以蒸馏水补足至总体积5 mL。其中对照管以1 mL蒸馏水代替样液，样底管以乙醇代替水杨酸溶液，摇匀后37 ℃水浴0.5h，离心，510 nm 处测定吸光值。清除率计算公式如下：
清除率（ %）=[1-（ A1-A2） /A0]×100%
2.结果与讨论
2.1对有机自由基（DPPH·）清除能力测定结果
DPPH·是一种很稳定的以氮为中心的自由基，在517nm处有强吸收峰，通常被用来检测抗氧化剂的抗氧化活性。当有自由基清除剂存在时，DPPH·会和清除剂提供的质子结合形成DPPH-H，引起A5l7nm降低，吸光值降低幅度越大则自由基清除率越高[4]。穇子对DPPH·的清除效果见图1，结果显示穇子DPPH·有较强的清除能力。且清除率呈现较好的量效关系。浓度为2.0mg/mL至6.0mg/mL时，对DPPH·的，清除率為21.86%至76.12%。
2.2羟基自由基清除能力测定结果
在活性氧中羟自由基化学性质最活泼，反应性极强，寿命很短，是己知的最强的氧化剂，几乎能和所有的细胞成分发生反应，如和蛋白质、核酸发生反应从而损伤生物体。这些损伤能引起衰老、癌症等多种疾病，因此清除·OH是对抗疾病的有效手段之一[5]。由图2可知，穇子对·OH有清除能力。且清除率呈现较好的量效关系，浓度为2mg/ml至6mg/ml之间对·OH清除率为9.83%至37.43%。
3.结论
通过检测生物试剂对DPPH·自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱[6]，因为DPPH·是一种稳定的有机自由基。根据DPPH·具有单电子在517nm处有呈深紫色的强吸收[7-8]，因此当有自由基清除剂存在时，与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数成定量关系，因而可用分光光度法进行定量分析[9]。该方法快速、简单、灵敏、直接，所以经常被用来筛选天然抗氧化剂。自由基的种类繁多，对生物机体危害最大的是羟自由基，机体中线粒体产生的·02-最终也常以·OH形式存在，故实验室中检测抗氧化物质对自由基的清除能力时常用清除的·OH和·02-能力作为衡量指标[10]。实验结果表明，穇子对DPPH·、·OH均有清除能力，且呈现较好的量效关系，在浓度2.0mg/mL至6.0mg/mL时，对DPPH·的清除率为21.86%至76.12%，对·OH清除率为9.83%至37.43%。鉴于自由基中DPPH·、·OH对生物机体危害较大，而穇子具有良好的清除DPPH·、·OH活性，故穇子作为天然抗氧化剂开发潜力极大。 参考文献：
[1]中华本草[M].上海科技出版社，2000，8.344-345.
[2]郭爽.四种抗氧化剂的活性研究及测定总抗氧化能新法初探[D].河南：河南农业大学硕士学位，2005.
[3] K.T.Tang， L. N. Liang， Y.Q.Cai，et al.Determination of sugars and sugar alcohols in tobacco feed liquids by high performance anion exchange and pulsed amperometric detection. Chin J Anal Chem，2007，35：1274-1278.
[4] C.H.Jung， H.M.Seog，I.W. Choi，et al.Antioxidant activities of cultivated and wild Korean ginseng leaves[J].Food Chemistry，2005，92： 535-540.
[5]G. Kaur， Z. Jabbar， M. Athar， et al.Punica granatum （pomegranate） flower extract possesses Potent antioxidant activity and abrogates Fe-NTA induced hepatotoxicity in mice[J].Food and Chemical Toxieology，2006，44：984-993.
[6]Y. Lu， L. Y. Foo. Identification and quantification of major polyphenol in apple pomace [J].Food Chemistry，1997，59： 187-194.
[7]叶勇.植物天然抗氧化成分及其效果[J].中国食品添加剂，2000，（4）：45-48.
[8]杜玉，娄红祥.天然植物抗氧化剂的作用机制研究概况[J].中药材，2006，29（7）：739-743.
[9]M. Bergman， T. Vzrshavskyl，I. H. Gottl.The antioxidant activity of aqueous spinach extraet： chemical identification of active fractions[J].Phytochemistry，2001，58（l）：143-152.
[10]賈秀月，高艳华，赵晓莲等.自由基与抗衰老的研究概况[J].黑龙江医药科学，2007，30（2）：75-76.
作者简介：
罗泽萍（1987-），女，助教，硕士，研究方向：生化药理学。
潘立卫（1987-），男，壮族，实验员，硕士，研究方向：中草药有效成分研究。