探讨沉默富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)基因对人肝癌Hep3B细胞增殖、侵袭及迁移的影响。
方法构建Pyk2基因RNA干扰(RNAi)载体，脂质体转染至肝癌Hep3B细胞，实验分3组，Pyk2 RNA干扰组(siRNA组)：转染携带Pyk2基因RNAi的质粒；阴性对照组：转染不携带Pyk2基因RNAi的空载质粒；空白对照组：未转染任何质粒。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting鉴定Pyk2基因和蛋白表达；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell侵袭和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移等生物学特性。
结果Pyk2基因干扰后肝癌Hep3B细胞Pyk2 mRNA的表达(0.16±0.03)较阴性对照组(0.74±0.13)和空白对照组(0.77±0.16)均明显下降，差异均有统计学意义(t＝51.46，P＝0.000；t＝53.21，P＝0.000)。Pyk2基因干扰后肝癌Hep3B细胞Pyk2蛋白的表达(0.24±0.06)较阴性对照组(0.83±0.05)和空白对照组(0.91±0.06)均明显下降，差异均有统计学意义(t＝57.29，P＝0.000；t＝68.53，P＝0.000)。siRNA组48 h细胞增殖抑制率(26.17%±0.28%)较阴性对照组(9.28%±0.22%)和空白对照组(6.47%±0.31%)明显提高，差异均有统计学意义(t＝31.45，P＝0.004；t＝34.64，P＝0.002)。siRNA组细胞的穿膜细胞数(32.5±8.5)/10 HP明显低于阴性对照组(98.4±12.3)/10 HP和空白对照组(112.6±11.3)/10 HP，差异有统计学意义(t＝95.64，P＝0.000；t＝105.17，P＝0.000)。siRNA组的划痕愈合率(28.17%±1.46%)显著低于阴性对照组(77.38%±2.24%)和空白对照组(79.41%±3.17%)，差异有统计学意义(t＝85.86，P＝0.000；t＝89.37，P＝0.000)。
结论Pyk2基因参与肝癌Hep3B细胞的增殖、侵袭及迁移，与肿瘤发展、侵袭、转移等密切相关，Pyk2有望成为肝癌诊断和治疗的分子靶标。