探讨白细胞介素22(IL-22)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)表达核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)的影响;并进一步研究IL-22是否与牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)具有协同刺激作用。
方法酶消化法结合组织块法原代培养hPDLF,免疫细胞化学染色法鉴定其来源;取第3~ 5代细胞给予不同浓度(0、5、10、25、50、100 ng/mL)IL-22刺激,培养24、48、72 h采用细胞计数试剂盒(CCK-8)进行细胞毒性实验;采用5、10、25 ng/mL IL-22作用于hPDLF 72 h,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测RANKL、OPG mRNA的表达;随后选择最佳刺激浓度10 ng/mL IL-22,与1 μg/mL Pg-LPS分别或协同刺激hPDLF 72 h,实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RANKL、OPG mRNA和蛋白水平的表达。采用单因素方差分析对数据进行统计分析。
结果50、100 ng/mL IL-22刺激hPDLF后,细胞活力明显下降(F24 h= 15.17,F48 h= 76.37,F72 h= 24.409,P<0.05);5、10、25 ng/mL IL-22均可上调hPDLF RANKL mRNA表达(F= 32.88,P<0.05),但是对OPG mRNA表达无明显影响(F= 0.719,P= 0.555);10 ng/mL组和25 ng/mL组上调RANKL mRNA表达较5 ng/mL组显著(P<0.05);1 μg/mL Pg-LPS亦可显著上调hPDLF RANKL mRNA和蛋白水平的表达;而10 ng/mL IL-22与1 μg/mL Pg-LPS协同作用下RANKL mRNA和蛋白表达可进一步显著上调(FmRNA= 36.67,F蛋白= 41.24,P<0.05),但是对OPG的表达无明显影响(FmRNA= 0.652,P= 0.593;F蛋白= 1.271,P= 0.313)。
结论IL-22可通过影响hPDLF表达RANKL/OPG参与牙周炎骨破坏,并且与Pg-LPS具有协同作用。