【摘 要】
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目的:观察LKB1基因对Hela细胞株的抑制作用,探讨其可能的分子机制。方法:体外培养LKB1表达缺失的Hela细胞株,脂质体介导LKB1质粒转染,G418抗性筛选获得稳定表达株。研究细胞
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目的:观察LKB1基因对Hela细胞株的抑制作用,探讨其可能的分子机制。方法:体外培养LKB1表达缺失的Hela细胞株,脂质体介导LKB1质粒转染,G418抗性筛选获得稳定表达株。研究细胞周期的变化,Western blot检测磷酸化Rb、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、AMPKα(adenosine monophosphate activated protein kinaseα)及磷酸化AMP-Kα的蛋白表达,分析AMPK抑制剂Compound C对PCNA表达的影响。结果:成功构建稳定表达LKB1的Hela细胞系,与空质粒对照组细胞相比,LKB1蛋白稳定表达后使Hela细胞G1期比例明显增加而S期比例减少,Rb蛋白的磷酸化水平、PCNA表达水平明显降低,AMPKα的磷酸化水平明显增强,当用Compound C抑制AMPK活性后,PCNA蛋白表达水平明显提高。结论:在Hela细胞中,LKB1通过激活AMPK信号通路,抑制Rb蛋白的磷酸化,使细胞周期停滞在G1期,抑制细胞增殖。
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