利用in silico及反向PCR技术,从小麦中克隆了亚硝酸还原酶编码基因及其调控序列,进一步利用原核诱导表达、半定量RT-PCR、AS-PCR及生物信息学手段对克隆的新基因进行鉴定及染色体定位分析。开放阅读框预测结合测序结果表明,该基因gDNA长2 881 bp,包含4个外显子和3个内含子,cDNA长1 830 bp,GenBank登录号分别为FJ555239和FJ527909,预测编码产物大小约为65.7 kD,与NCBI已公布的亚硝酸还原酶基因编码产物同源性达60%以上,其中与其他单子叶谷类作物同源性达80%以上。IPCR技术延伸该基因5′端侧翼序列至-2 924 bp(以ATG起始计算),经1 mmol L-1 IPTG诱导后可表达大小约为70 kD的蛋白(含约3.8 kD的组氨酸标签)。RT-PCR结果显示,30 mmol L-1 KNO3处理小麦幼苗1 h,亚硝酸还原酶基因表达量最高。酶活性测定表明,随着KNO3处理时间延长亚硝酸还原酶活性增强。AS-PCR检测发现,该基因在普通小麦6A及6B染色体上至少各存在1个拷贝。