【摘 要】
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目的比较中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)不同形式受体结合区(receptor binding domain，RBD)蛋白在抗体检测中的应用特点。方法以293T和ExpiCHO-S™系统表达并纯化制备MERS-CoV RBD，采用非变性凝胶电泳和Western blot对纯化RBD蛋白进行鉴定。然后以
【机 构】
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中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所 卫生部生物安全重点实验室，北京 102206,中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所 卫生部生物安全重点实验室，北京 102206,温州医科大学检验医学院、生命
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目的比较中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)不同形式受体结合区(receptor binding domain，RBD)蛋白在抗体检测中的应用特点。
方法以293T和ExpiCHO-S™系统表达并纯化制备MERS-CoV RBD，采用非变性凝胶电泳和Western blot对纯化RBD蛋白进行鉴定。然后以等量的上述RBD蛋白或昆虫细胞表达的RBD作为包被抗原，建立间接酶联免疫检测方法(enzyme-linked immune sorbent assay，ELISA)，用于MERS-CoV IgG抗体检测。同时以商品化的欧蒙MERS-CoV IgG抗体检测试剂盒(以S1为包被抗原)为对照，利用WHO提供的MERS-CoV抗体参比品对基于不同RBD蛋白抗原的ELISA方法进行应用效果比较分析。
结果采用293T和ExpiCHO-S™系统成功制备MERS-CoV RBD单体/聚体抗原；不同来源与形式的RBD抗原均能特异识别MERS-CoV特异抗体，与正常成人血清无交叉反应；基于RBD所建立的ELISA应用于MERS-CoV抗体参比品检测，与欧蒙商品化试剂盒检测结果具有较好的一致性，但RBD-T4f、RBD-GCN4聚体RBD检测阳性标本的读值高且较集中，单体/二聚体RBD(昆虫细胞或哺乳动物细胞)阳性标本的读值低且较分散。
结论建立了基于MERS-CoV不同单体与聚体RBD蛋白抗原的间接ELISA检测方法，可替代欧蒙商品化试剂盒用于临床检测MERS-CoV特异IgG抗体。RBD-T4f、RBD-GCN4包被抗原的应用结果优于RBD抗原。
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