【摘 要】
：
目的 构建干扰Ppif基因的重组U6慢病毒质粒,观察内源性小干扰RNA(siRNA)的效果.方法 根据siRNA设计原则,设计合成短发卡RNA(shRNA),用于体内转录合成干扰Ppif编码序列的发夹RNA.连接、筛选、酶切,鉴定Pgcl-GFP/U6 Ppif shRNA;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染大鼠肾细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Wester
【机 构】
：
430060武汉大学人民医院泌尿外科,430060武汉大学人民医院泌尿外科,430060武汉大学人民医院泌尿外科,430060武汉大学人民医院泌尿外科,430060武汉大学人民医院泌尿外科,43006
论文部分内容阅读
目的 构建干扰Ppif基因的重组U6慢病毒质粒,观察内源性小干扰RNA(siRNA)的效果.方法 根据siRNA设计原则,设计合成短发卡RNA(shRNA),用于体内转录合成干扰Ppif编码序列的发夹RNA.连接、筛选、酶切,鉴定Pgcl-GFP/U6 Ppif shRNA;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染大鼠肾细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测mRNA和蛋白表达水平与对照组的差异.结果 测序证实重组质粒构建成功,体外试验表明,Ppif基因的mRNA和蛋白表达均一致降低[(0.582 ±0.014)％],与阴性对照组[(0.946±0.018)％]和空白对照组[(0.893±0.021)％]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢病毒介导的Ppif-shRNA成功在体外敲减了大鼠肾细胞的目的蛋白表达,影响了肾缺血再灌注的发生与发展。
其他文献
目的 观察右美托咪定预防小儿扁桃体腺样体切除术全凭静脉麻醉苏醒期躁动的作用.方法 将60例全凭静脉麻醉下行择期扁桃体腺样体切除术患儿,随机分为实验组(A组)与对照组(B组),诱导后分别持续静脉泵入右美托咪定每小时0.2 μg/kg和等容量的生理盐水至手术结束.记录患儿手术时间、停药至清醒时间、恢复室滞留时间、到达恢复室即刻改良Aldrete评分、进入恢复室后30 min内根据儿童麻醉后躁动评分(P
目的 探讨Cullin7蛋白在乳腺浸润性导管癌表达及其与临床病理因素之间的关系.方法 应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测13例正常乳腺组织、20例良性乳腺肿瘤、68例乳腺癌和32例乳腺癌腋窝淋巴结转移灶组织标本中Cullin7蛋白的表达.结果 正常乳腺组织组、良性乳腺肿瘤组、乳腺浸润性导管癌组及乳腺癌腋窝淋巴结转移灶组中Cullin7蛋白强阳性表达率分别是0、30.0％、
目的 建立人乳腺癌多西他赛耐药细胞株BT549/Docetaxel,探讨其多药耐药基因三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2 (ABCG2)、三磷酸腺苷结合转运蛋白B1(ABCB1)、多药耐药相关蛋白1(ABCC1)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)和β-微管蛋白Ⅲ(TUBB3)的表达及意义.方法 采用多西他赛中等浓度、间歇作用法建立耐药细胞
血管生成是在已经存在的血管中形成新的毛细血管的过程,它对于器官的生长和修复至关重要.细胞外基质(ECM)由多种蛋白成分构成,除了为组织细胞的生长提供结构性的支撑以外,在血管生成过程的各个阶段如血管内皮细胞的出芽,管腔的形成、成熟和稳定发挥着不可忽视的作用.血管生成开始于血管基膜的降解,内皮细胞在间质性基质环境中出芽.在出芽阶段,ECM结合整合素为内皮细胞的增殖和迁移提供重要信号.通过基质金属蛋白酶
我们设计狭长窄蒂皮瓣局部注射重组人生长激素(rhGH)实验,探讨rhGH对内源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、CD34表达及微血管数的影响,为rhGH促进狭长窄蒂皮瓣成活及扩展皮瓣临床应用提供理论依据.一、材料与方法1.实验材料:健康SD大鼠,雌雄不拘,体质量350 ～370 g(由苏州工业园区爱尔麦特科技有限公司提供),rhGH(安科生物),鼠bFGF、CD34免疫组织化学试剂盒,bFGF
骨肉瘤是青少年最常见的恶性骨肿瘤,其恶性程度高,易转移[1].我们的前期研究结果显示Ether à go-go 1(Eag1)通道在骨肉瘤细胞和组织中异常表达[2].本实验旨在检测Eag1通道抑制剂对人骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响并探讨其作用机制.一、材料与方法1.材料:人骨肉瘤细胞株MG63和SAOS-2购自中国科学研究院上海细胞库;RPMI 1640培养基和小牛血清购自美国Hyclone公司;噻
目的 观察聚乙烯亚胺作为载体介导骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染脂肪干细胞(ADSCs)的基因表达,探讨转染后细胞的成骨分化效果.方法 取成年日本大耳白兔的颈部脂肪10 g,经体外分离培养的方法获得ADSCs,并对其进行表型鉴定,用相对分子质量为13×103的聚乙烯亚胺介导BMP@基因转染至ADSCs,G418筛选获得阳性细胞克隆.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMP-2mRNA
目的 探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因rs1625649多态性与乳腺癌易感性的关系.方法 乳腺癌患者55例,健康对照者119例,采用高分辨熔解曲线法(HRM)进行突变筛查,并进行测序验证.结果 乳腺癌患者MGMT基因第2启动子区域检测到1个多态性位点,经测序验证,该位点为rs1625649.MGMT rs1625649位点A携带患者的危险度较对照组升高[P＜0.05,比值比(
目的 观察痰塔特姆氏菌溶解草酸钙结石的效果并与乙二胺四乙酸(EDTA)比较.方法 用痰塔特姆氏菌溶解草酸钙结石.重量分析法、配位滴定法和分光光度法分别测定草酸钙质量、钙离子和草酸根含量.结果 痰塔特姆氏菌、EDTA具有一定的溶解草酸钙结石的能力,在糜蛋白酶协助下溶石量增加.结论 痰塔特姆氏菌具有一定的溶解草酸钙结石的能力,12h内随菌群数增加溶石效果增强。
目的 采用二维斑点追踪成像及组织多普勒技术观察房间隔缺损患者修补术前后右室整体及局部功能的变化.方法 选取继发孔型房间隔缺损患者30例,分别于术前(A组)及术后1月(B组)行常规经胸超声心动图检查,采用二维斑点追踪成像技术分别测定右室游离壁及室间隔各节段的应变和应变率,并通过组织多普勒技术测定右室Tei指数,另设30例正常人对照组(C组).结果 术前组右心室游离壁基底段、中间段及心尖段的应变和应变