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摘要：本文利用三重串联四级杆质谱的方式，对葡萄酒中残留的有害物质进行测定与分析。采用1%浓度的乙酸乙腈物质，利用固相萃取柱净化后，通过C18柱分离处理，在电喷雾正离子化模式下，采用多反应检测器进行测定；在1.0—0.001g/mL浓度范围内，线性关系较为显著，相关系数均超过0.99，检出限为0.001—0.01g/mL；当水平添加量为0.5g/mL时，有害物质的回收率为65.91—121.25%，相对标准偏差范围在0.41—24.97%，其中大部分有害物质的回收率均能够达到70%—120%，相对相差低于15%；此种方式应用较为简单、灵敏，能够有效应用于葡萄酒中有害物质残留的检测当中。
关键词：葡萄酒；有害物质；农药残留
引言：
葡萄酒作为食品之一深受中西方人们的喜爱，主要是以鲜葡萄或者葡萄汁作为原料，将全部或者局部发酵后酿制而成，内部含有一定的酒精，在性质上属于发酵酒。在种植过程中，葡萄很容易受到农业环境中多种因素的影响，如若没有及时喷洒农药，则会产生白粉病、霜霉病、炭疽病等等，为种植户带来极大的经济损失。但是，由于我国在葡萄上喷洒的农药众多，不可避免的在葡萄酒中存在农药残留，对于其他的果蔬食品来说也是如此，由此可见对食品中残留有害物质进行检测显得十分必要。
1.实验材料与方法
1.1实验材料
在对葡萄酒中的农药残留进行检测时，主要使用的试剂为乙酸、甲苯、甲醇、甲酸、乙腈、无水硫酸钠、无水乙酸钠、氨基固萃取柱、纯度超过95.5%的农药标准品等等；实验设备上，利用Agilent 6410 Tripe Quad LC/MS液质联用仪；SG3200HBT超声波清洗器；0.2有机系微孔过滤膜；RE-52AA旋转蒸发仪；尺寸为50mm×2.1mm的色谱柱；TTL-DL型多功能氮吹仪等等。
1.2实验方法
现阶段，对葡萄酒中有害物质的检测方式多种多样，如液相色谱法、气相色谱法等等。其中，四级杆质谱具有较强的灵敏性、线性范围较宽，能够在多个检测领域中得到广泛应用。目前，对于LC-MSMS与GC-MS在农药残留物质检测中的应用已经成为业界的热点话题。对于液相色谱法来说，由于受到自身特性的影响，在对热稳定性较差、挥发性较差的农药检测来说效果十分明显，如氨基酸酯类农药等等。同时，质谱检测器具有较强的敏感性，能够对外界信息进行充分吸收，对于基质较为复杂的农药残留来说，还可以利用其完成筛选工作，且效果较为理想。基于此，本文采用液相色谱三重串联四级质谱法，针对葡萄酒中的有害物质进行测定与分析，此种方式不但快捷，而且十分灵敏，能够充分符合目前食品中有害物质检测的相关需求[1]。
2.实验方法
2.1准备阶段
利用相应设备量取10ml的样品，将其放置到50ml的具塞离心管当中，将15ml的乙酸乙腈溶液加入其中，并且利用混合器将其搅拌大约2min；然后，将1.5g左右的无水乙酸钠放入到具塞离心管当中，再次搅拌大约1min后，将6g无水硫酸钠放入离心管中，再次震荡2min，每分钟8000r，离心5min，将表面上的清液过滤出来，放入到鸡心瓶当中，在40℃的水浴中旋转蒸发，时间大约在1min左右。
将高度大约为2cm的无水硫酸钠放入到NH2固相萃取柱当中，并将该柱与鸡心瓶相互连接，一同放置在固定架中。在样品加入以前，首先用5ml的乙腈与甲苯对萃取柱进行清洗，当液面没过硫酸钠顶部时，立即将样品提取液转移到净化柱当中，并且用新的鸡心瓶进行接收。然后，再次医用25ml乙腈与甲苯对农药与其他化学物品进行清洗，在鸡心瓶中放入40℃的热水进行旋转，使其浓度降低到0.5ml，这时将其放置于35℃的氮气下吹干，利用1mL甲醇对残渣进行溶解后，在0.2微孔濾膜过滤后，便可使用液相色谱—串联质谱对所得物进行测定。
2.2测定条件
（1）色谱条件。色谱柱的型号应为ZORBAX SB-C，尺寸为50×2.1mm，柱体温度为40℃，进样量为5，具体的流动与梯度洗脱条件为：当总时间为3min时，流速为400/min；流动相A为浓度为0.1%的甲酸水，含量为70.0%；流动相B为乙腈，含量为30.0%；当总时间为6min时，流速为400/min；流动相A为60.0%；流动相B为40.0%；当总时间为9min时，流速为400/min；流动相A为40.0%；流动相B为40.0%。
（2）质谱条件。电离源极性为正模式；雾化气压力为0.28MPa；干燥气温度为350℃；雾化气的气体为氮气；电离源为电喷雾离子化模式；干燥气的流速为10L/min；检测方式为MRM多反应扫描法[2]。
2.3实验结果与讨论
2.3.1色谱分离结果
分别对不同保留时间基础上的有害物质进行MRM扫描，在LC-MS/MS分离作用下，能够得出较为理想的结果。将浓度为100g/ml的有害物质，利用甲醇溶液对其进行稀释，使其分别为1.0g/ml、0.5g/ml、0.1g/ml、0.01g/ml以及0.001g/ml几个浓度梯度的标准溶液，然后以离子峰面积与浓度作为变量，绘制出校正曲线，根据信噪比Rspt为3与10分别求出检出限以及定量限。从实验结果中能够看出，有害物质在1.0—0.001时，具有较为理想的线性关系；在相关系数上大于3个数量级，即R2的数值超过0.99，部分有害物质的相关系数超过0.999；有害物质的检出限为0.001—0.01g/mL之间，葡萄酒中的农药化合物检出限与国内标准相比较低，能够符合葡萄酒中农药有害物质检测规定。
2.3.2实验方式精准度分析
在对葡萄酒中农药残留物质进行检测中，分别利用添加回收率代表实验方法的精准度，用相对标准偏差表示实验方法的精密度，在不同天加水平背景下，多次对加标回收率进行计算，并且完成空白实验，以三次测定结果为依据，对相对标准偏差进行计算。从结果中表明，当水平添加量为0.5g/mL时，有害物质的回收率为65.91—121.25%，相对标准偏差范围在0.41—24.97%，其中大部分有害物质的回收率均能够达到70%—120%，相对相差低于15%，与我国规定的弄好残留检测要求充分符合[3]。
结论：
综上所述，本文针对葡萄酒中的农药残留有害物质进行测定与分析，主要采用液相色谱-串联质谱的方式，通过实验结果表明，在1.0—0.001g/mL浓度范围内，线性关系较为显著，相关系数均超过0.99，检出限为0.001—0.01g/mL；当水平添加量为0.5g/mL时，有害物质的回收率为65.91—121.25%，相对标准偏差范围在0.41—24.97%，其中大部分有害物质的回收率均能够达到70%—120%，相对相差低于15%；此种方式应用较为简单、灵敏，能够有效应用于葡萄酒中农药残留的检测当中，为我国食品中有害物质检测工作带来极大便利。
参考文献：
[1]朱莉，王锐，李鹏跃，等. 三重四级杆串联质谱（LC-MS/MS）法同时测定复方广痛消水提物中5种有效成分的含量[J]. 中国实验方剂学杂志，2014，19（10）：98-102.
[2]蔡惠坚. 液相色谱—串联质谱法用于水产品中有害物质的高灵敏度检测[D]. 福州大学，2014.
[3]屠海云，肖海龙，朱顺达，等. 液相色谱-串联质谱法测定食品中红2G、酸性红、酸性红52着色剂方法研究[J]. 中国食品，2016，No.578（10）：82-84.
关键词：葡萄酒；有害物质；农药残留
引言：
葡萄酒作为食品之一深受中西方人们的喜爱，主要是以鲜葡萄或者葡萄汁作为原料，将全部或者局部发酵后酿制而成，内部含有一定的酒精，在性质上属于发酵酒。在种植过程中，葡萄很容易受到农业环境中多种因素的影响，如若没有及时喷洒农药，则会产生白粉病、霜霉病、炭疽病等等，为种植户带来极大的经济损失。但是，由于我国在葡萄上喷洒的农药众多，不可避免的在葡萄酒中存在农药残留，对于其他的果蔬食品来说也是如此，由此可见对食品中残留有害物质进行检测显得十分必要。
1.实验材料与方法
1.1实验材料
在对葡萄酒中的农药残留进行检测时，主要使用的试剂为乙酸、甲苯、甲醇、甲酸、乙腈、无水硫酸钠、无水乙酸钠、氨基固萃取柱、纯度超过95.5%的农药标准品等等；实验设备上，利用Agilent 6410 Tripe Quad LC/MS液质联用仪；SG3200HBT超声波清洗器；0.2有机系微孔过滤膜；RE-52AA旋转蒸发仪；尺寸为50mm×2.1mm的色谱柱；TTL-DL型多功能氮吹仪等等。
1.2实验方法
现阶段，对葡萄酒中有害物质的检测方式多种多样，如液相色谱法、气相色谱法等等。其中，四级杆质谱具有较强的灵敏性、线性范围较宽，能够在多个检测领域中得到广泛应用。目前，对于LC-MSMS与GC-MS在农药残留物质检测中的应用已经成为业界的热点话题。对于液相色谱法来说，由于受到自身特性的影响，在对热稳定性较差、挥发性较差的农药检测来说效果十分明显，如氨基酸酯类农药等等。同时，质谱检测器具有较强的敏感性，能够对外界信息进行充分吸收，对于基质较为复杂的农药残留来说，还可以利用其完成筛选工作，且效果较为理想。基于此，本文采用液相色谱三重串联四级质谱法，针对葡萄酒中的有害物质进行测定与分析，此种方式不但快捷，而且十分灵敏，能够充分符合目前食品中有害物质检测的相关需求[1]。
2.实验方法
2.1准备阶段
利用相应设备量取10ml的样品，将其放置到50ml的具塞离心管当中，将15ml的乙酸乙腈溶液加入其中，并且利用混合器将其搅拌大约2min；然后，将1.5g左右的无水乙酸钠放入到具塞离心管当中，再次搅拌大约1min后，将6g无水硫酸钠放入离心管中，再次震荡2min，每分钟8000r，离心5min，将表面上的清液过滤出来，放入到鸡心瓶当中，在40℃的水浴中旋转蒸发，时间大约在1min左右。
将高度大约为2cm的无水硫酸钠放入到NH2固相萃取柱当中，并将该柱与鸡心瓶相互连接，一同放置在固定架中。在样品加入以前，首先用5ml的乙腈与甲苯对萃取柱进行清洗，当液面没过硫酸钠顶部时，立即将样品提取液转移到净化柱当中，并且用新的鸡心瓶进行接收。然后，再次医用25ml乙腈与甲苯对农药与其他化学物品进行清洗，在鸡心瓶中放入40℃的热水进行旋转，使其浓度降低到0.5ml，这时将其放置于35℃的氮气下吹干，利用1mL甲醇对残渣进行溶解后，在0.2微孔濾膜过滤后，便可使用液相色谱—串联质谱对所得物进行测定。
2.2测定条件
（1）色谱条件。色谱柱的型号应为ZORBAX SB-C，尺寸为50×2.1mm，柱体温度为40℃，进样量为5，具体的流动与梯度洗脱条件为：当总时间为3min时，流速为400/min；流动相A为浓度为0.1%的甲酸水，含量为70.0%；流动相B为乙腈，含量为30.0%；当总时间为6min时，流速为400/min；流动相A为60.0%；流动相B为40.0%；当总时间为9min时，流速为400/min；流动相A为40.0%；流动相B为40.0%。
（2）质谱条件。电离源极性为正模式；雾化气压力为0.28MPa；干燥气温度为350℃；雾化气的气体为氮气；电离源为电喷雾离子化模式；干燥气的流速为10L/min；检测方式为MRM多反应扫描法[2]。
2.3实验结果与讨论
2.3.1色谱分离结果
分别对不同保留时间基础上的有害物质进行MRM扫描，在LC-MS/MS分离作用下，能够得出较为理想的结果。将浓度为100g/ml的有害物质，利用甲醇溶液对其进行稀释，使其分别为1.0g/ml、0.5g/ml、0.1g/ml、0.01g/ml以及0.001g/ml几个浓度梯度的标准溶液，然后以离子峰面积与浓度作为变量，绘制出校正曲线，根据信噪比Rspt为3与10分别求出检出限以及定量限。从实验结果中能够看出，有害物质在1.0—0.001时，具有较为理想的线性关系；在相关系数上大于3个数量级，即R2的数值超过0.99，部分有害物质的相关系数超过0.999；有害物质的检出限为0.001—0.01g/mL之间，葡萄酒中的农药化合物检出限与国内标准相比较低，能够符合葡萄酒中农药有害物质检测规定。
2.3.2实验方式精准度分析
在对葡萄酒中农药残留物质进行检测中，分别利用添加回收率代表实验方法的精准度，用相对标准偏差表示实验方法的精密度，在不同天加水平背景下，多次对加标回收率进行计算，并且完成空白实验，以三次测定结果为依据，对相对标准偏差进行计算。从结果中表明，当水平添加量为0.5g/mL时，有害物质的回收率为65.91—121.25%，相对标准偏差范围在0.41—24.97%，其中大部分有害物质的回收率均能够达到70%—120%，相对相差低于15%，与我国规定的弄好残留检测要求充分符合[3]。
结论：
综上所述，本文针对葡萄酒中的农药残留有害物质进行测定与分析，主要采用液相色谱-串联质谱的方式，通过实验结果表明，在1.0—0.001g/mL浓度范围内，线性关系较为显著，相关系数均超过0.99，检出限为0.001—0.01g/mL；当水平添加量为0.5g/mL时，有害物质的回收率为65.91—121.25%，相对标准偏差范围在0.41—24.97%，其中大部分有害物质的回收率均能够达到70%—120%，相对相差低于15%；此种方式应用较为简单、灵敏，能够有效应用于葡萄酒中农药残留的检测当中，为我国食品中有害物质检测工作带来极大便利。
参考文献：
[1]朱莉，王锐，李鹏跃，等. 三重四级杆串联质谱（LC-MS/MS）法同时测定复方广痛消水提物中5种有效成分的含量[J]. 中国实验方剂学杂志，2014，19（10）：98-102.
[2]蔡惠坚. 液相色谱—串联质谱法用于水产品中有害物质的高灵敏度检测[D]. 福州大学，2014.
[3]屠海云，肖海龙，朱顺达，等. 液相色谱-串联质谱法测定食品中红2G、酸性红、酸性红52着色剂方法研究[J]. 中国食品，2016，No.578（10）：82-84.