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摘 要：为了保证生物农药在使用方面有良好的安全性，应认识到生物农药实际残留量检验工作的重要性，并能结合生物农药特点以及残留量检查需要，制定科学的生物农药残留量检查方案。本文就水果蔬菜当中7种新出现的生物农药相应的残留量检测方法进行了分析。
关键词：蔬菜;水果;生物农药;残留量;检测
现代农业领域往往会使用各种农来对影响水果、蔬菜正常生长的病害以及虫害进行防治，并且在农业领域不断发展中，也出现了大量新型农药，进一步推动了农业领域水果蔬菜产量的提升。但在这些生物农药使用中是，也会在水果蔬菜上存在一定的残留量，需要技术人员做好相应的残留检测工作。
1 生物农药概述
农药在农业领域发展中起到了关键性的作用，有效的促进了水果、蔬菜等农业产品在产量方面的提升，并且在农业领域的持续发展中也出现了一些新型的生物农药，让农业领域的发展更加的高速化、多元化。比如目前农业领域中出现的生物农药，从生物农药的制造方面来看，其主要是利用了果实等生物活体在代谢阶段产生的产物，在结合现代生物科学技术完成相应的仿生合成，形成批量化、高质量化的生物农药生产，在将生物农药运用到农业领域当中的时候能有效完成生物杀菌或者是生物抑制，切实的推动农业生产领域当中产量的提升。而由于生物农药是以生物代谢产物为基础进行的生产，因此这种生物农药在使用中也就表现出了无公害性、低毒性以及不易出现抗药性的特点，代表了现代农业领域当中的农药生产、制备在朝向绿色化发展。而从生物农药制备源方面来看，这种生物农药的可以划分为微生物源类型、动物源类型以及植物源类型三种类型，目前生物农药在农业领域水果、蔬菜植物病虫害防治方面发挥了良好作用，并且也在大范围内得到了推广。
由于生物农药发展较快，在当前的农业领域当中出现了多种类型的生物农药，这些生物农药虽然能有效的对水果、蔬菜病虫害进行防治，但由于这些生物农药当中部分成分较为特殊，因此可能会对人体造成影响，需要相应部门做残留量检查工作，保证生物农药有良好的使用。但苦参碱、印楝素、鱼藤酮、烟碱等类型的生物农药在使用中未能制定出相应的检测标准，影响了相应生物农药的检验工作质量，不利于生物农药的发展。而在部分研究中发现印楝素这种物质带有一定的遗传毒性，有可能会导致人体当中精子出现畸形，最终影响到人类的生育功能。而苦参碱则带有一定的神经毒性，这种物质可能会对人体的肝脏系统、造血系统以及肾脏系统造成影响。因此在使用生物农药的阶段中，需要相应的部门做好生物农药检查工作，使用多种方式对生物农药的残留量进行检验，并能做好实际残留量的检查工作，让生物农药的使用以及管理更加的科学化。当前在对生物农药实际残留量进行检验的时候会使用多种技术，比如分光光度技术、生物电极技术、液相色谱技术等众多技术。
本文使用全自动类型固相萃取结合液相色谱技术，对蔬菜水果当中的苦参碱物质、烟碱物质、藜芦碱物质、氧化类型苦参碱物质以及印楝素、井岗酶这7种生物农药的实际残留量检验方法进行了分析，以期让生物农药实际残留量的检测以及监控工作有更好的質量。
2 材料以及方法分析
2.1 仪器以及试剂
仪器：WatersQuattroPremierXEUPLC-MS/MS，北京优兴全自动固相萃取仪;BUCHI平行蒸发仪;IKA涡旋振荡器;科导超声仪;Sigma3-18K高速离心机。试剂：甲醇（Fisher，色谱纯），乙腈（Fisher，色谱纯），甲酸（FA）（Fisher，色谱纯），氨水（GR），乙酸（HA）（GR）。生物农药标准品（北京坛墨质检）：苦参碱、烟碱、鱼藤酮、氧化苦参碱、印楝素、黎芦碱、井岗霉素。WatersMCX固相萃取小柱（60mg，3mL）。
2.2 检测条件
色谱柱：WatersHILIC1.7μm，2.1×100mm，柱温：40℃，进样体积：10μL。流动相：A5mmol/L乙酸铵（含0.1%甲酸（FA）），B乙腈。毛细管电压：1.0kV，源温：120℃，脱溶剂温度：350℃，脱溶剂气流速：800（L/h）。
2.3 测定方法分析
首先要完成样品的制备，需要检验人员准确称量出5g样品，将这些样品加入到总量为20毫升的质量分为2%的乙酸溶液当中，并使用涡旋技术进行混合，在完成了混合处理之后还要使用超声技术进行时长为10分钟的提取，之后在进行离心操作，将离心处理之后出现的上清液完全转移到容量的为25毫升的比色管当中，并使用质量分为2%的乙酸溶液将其定容到25毫升，量取出5毫升的样品溶液。
而在后续的程序净化的时候，需要遵守全自动类型固相萃取操作的要。
活化1：甲醇→3mL→4mL/min;
活化2：纯水→3mL→6mL/min;
上样：不收集过柱液→5mL→3mL/min;
淋洗1：纯水→3mL→6mL/min;
淋洗2：甲醇→3mL→4mL/min;
柱干燥：3mL→6mL/min;
洗脱：5%氨化甲醇→6mL→3mL/min;
柱干燥：3mL→6mL/min。
收集洗脱液，蒸干，用流动相初始梯度定容至1mL，过0.20μm微孔滤膜后上机测试。
3 结果以及数据分析
3.1 色谱柱组件选择
在本次试验分析中目标生物农药中存在有叔胺基、仲胺以及醇羟基等极性类型的基团。
项目组比较了非极性柱（WatersBEHC18）、中等极性柱（WatersBEHT3）和强极性柱（WatersBEHHILIC）3种色谱柱对7种新型生物农药的分离效果。发现在C18柱上除鱼藤酮和印楝素有保留外，其他5种物质均没有保留;在T3柱上除井岗霉素没有保留外，其他6种物质均有保留，但个别组分峰形较胖;在HILIC柱上7种物质均有保留，且有比较好的峰形。所以最终选择HILIC柱作为分析柱组件。 3.2 固相萃取机理及小柱的选择
在反相萃取模式下，我们选择了Waters的HLB，Agilent的Plexa、PPL、Focus、ENV和DIKMA的C86种非极性固相萃取小柱作为吸附柱，用浓度为50ng/mL的标准品考察了7种生物农药在酸性、中性和碱性条件下6种小柱对7种生物农药的保留情况（洗脱液为甲醇）。结果发现在3种条件下6种小柱对井岗霉素都没有保留，不能满足方法的要求，但除井岗霉素外，在中性或碱性条件下HLB、Plexa、Focus和ENV这4种小柱对其他物质均有不错的保留。
3.3 正相萃取模式分析
在正相模式下，我们选择了NH4、PSA、FLORISI、PrimeHLB、NH4/Carb、Carb等6种极性吸附小柱，用濃度为50ng/mL的标准品考察了80%乙腈-水和乙腈两种溶液体系中7种生物农药在6种小柱中的保留情况。结果发现除PrimeHLB在80%乙腈-水体系中对7种生物农药有比较好的保留外，其他柱子和体系对井岗霉素都没有保留。这可能与井岗霉素的结构含有大量的醇羟基，极性极大无法洗脱有关。
3.4 样品检测结果分析
自该方法建立以来，成功应用于实验室内部300多批各种水果、蔬菜样品的检测，并多次检出生物农药烟碱残留，检测结果介于0.062～1.41mg/kg间。
4 结束语
本项目研究建立的水果蔬菜中7种新型生物农药残留全自动固相萃取-液质联用检测方法为果蔬中生物农药残留的检测提供了重要支持，为保证食品安全提供了重要保障，值得推广和应用。本检测方法可以配合国家相关部门开展生物农药残留监测的研究并制定相关生物农药残留的限量标准。
参考文献
[1]陈少芳，欧天成，罗轩.QuEChERS-气相色谱法测定果蔬中7种拟除虫菊酯类农药残留量的研究[J].海峡预防医学杂志，2016，22（3）：62-65.
[2]邬阳，郭艳，郭艳琼，etal.高效液相色谱-质谱法测定果蔬中氟虫腈等7种农药残留的方法研究[J].北方农业学报，2017，45（1）：70-75.
[3]谭颖，张琪，赵成，etal.蔬菜水果中的新烟碱类农药残留量与人群摄食暴露健康风险评价[J].生态毒理学报，2016，11（6）：67-81.
[4]陈惠琴，刘佳，蓝梦哲.蔬菜和水果中农残检测前处理技术研究进展[J].轻工科技，2017（6）：4-5.
关键词：蔬菜;水果;生物农药;残留量;检测
现代农业领域往往会使用各种农来对影响水果、蔬菜正常生长的病害以及虫害进行防治，并且在农业领域不断发展中，也出现了大量新型农药，进一步推动了农业领域水果蔬菜产量的提升。但在这些生物农药使用中是，也会在水果蔬菜上存在一定的残留量，需要技术人员做好相应的残留检测工作。
1 生物农药概述
农药在农业领域发展中起到了关键性的作用，有效的促进了水果、蔬菜等农业产品在产量方面的提升，并且在农业领域的持续发展中也出现了一些新型的生物农药，让农业领域的发展更加的高速化、多元化。比如目前农业领域中出现的生物农药，从生物农药的制造方面来看，其主要是利用了果实等生物活体在代谢阶段产生的产物，在结合现代生物科学技术完成相应的仿生合成，形成批量化、高质量化的生物农药生产，在将生物农药运用到农业领域当中的时候能有效完成生物杀菌或者是生物抑制，切实的推动农业生产领域当中产量的提升。而由于生物农药是以生物代谢产物为基础进行的生产，因此这种生物农药在使用中也就表现出了无公害性、低毒性以及不易出现抗药性的特点，代表了现代农业领域当中的农药生产、制备在朝向绿色化发展。而从生物农药制备源方面来看，这种生物农药的可以划分为微生物源类型、动物源类型以及植物源类型三种类型，目前生物农药在农业领域水果、蔬菜植物病虫害防治方面发挥了良好作用，并且也在大范围内得到了推广。
由于生物农药发展较快，在当前的农业领域当中出现了多种类型的生物农药，这些生物农药虽然能有效的对水果、蔬菜病虫害进行防治，但由于这些生物农药当中部分成分较为特殊，因此可能会对人体造成影响，需要相应部门做残留量检查工作，保证生物农药有良好的使用。但苦参碱、印楝素、鱼藤酮、烟碱等类型的生物农药在使用中未能制定出相应的检测标准，影响了相应生物农药的检验工作质量，不利于生物农药的发展。而在部分研究中发现印楝素这种物质带有一定的遗传毒性，有可能会导致人体当中精子出现畸形，最终影响到人类的生育功能。而苦参碱则带有一定的神经毒性，这种物质可能会对人体的肝脏系统、造血系统以及肾脏系统造成影响。因此在使用生物农药的阶段中，需要相应的部门做好生物农药检查工作，使用多种方式对生物农药的残留量进行检验，并能做好实际残留量的检查工作，让生物农药的使用以及管理更加的科学化。当前在对生物农药实际残留量进行检验的时候会使用多种技术，比如分光光度技术、生物电极技术、液相色谱技术等众多技术。
本文使用全自动类型固相萃取结合液相色谱技术，对蔬菜水果当中的苦参碱物质、烟碱物质、藜芦碱物质、氧化类型苦参碱物质以及印楝素、井岗酶这7种生物农药的实际残留量检验方法进行了分析，以期让生物农药实际残留量的检测以及监控工作有更好的質量。
2 材料以及方法分析
2.1 仪器以及试剂
仪器：WatersQuattroPremierXEUPLC-MS/MS，北京优兴全自动固相萃取仪;BUCHI平行蒸发仪;IKA涡旋振荡器;科导超声仪;Sigma3-18K高速离心机。试剂：甲醇（Fisher，色谱纯），乙腈（Fisher，色谱纯），甲酸（FA）（Fisher，色谱纯），氨水（GR），乙酸（HA）（GR）。生物农药标准品（北京坛墨质检）：苦参碱、烟碱、鱼藤酮、氧化苦参碱、印楝素、黎芦碱、井岗霉素。WatersMCX固相萃取小柱（60mg，3mL）。
2.2 检测条件
色谱柱：WatersHILIC1.7μm，2.1×100mm，柱温：40℃，进样体积：10μL。流动相：A5mmol/L乙酸铵（含0.1%甲酸（FA）），B乙腈。毛细管电压：1.0kV，源温：120℃，脱溶剂温度：350℃，脱溶剂气流速：800（L/h）。
2.3 测定方法分析
首先要完成样品的制备，需要检验人员准确称量出5g样品，将这些样品加入到总量为20毫升的质量分为2%的乙酸溶液当中，并使用涡旋技术进行混合，在完成了混合处理之后还要使用超声技术进行时长为10分钟的提取，之后在进行离心操作，将离心处理之后出现的上清液完全转移到容量的为25毫升的比色管当中，并使用质量分为2%的乙酸溶液将其定容到25毫升，量取出5毫升的样品溶液。
而在后续的程序净化的时候，需要遵守全自动类型固相萃取操作的要。
活化1：甲醇→3mL→4mL/min;
活化2：纯水→3mL→6mL/min;
上样：不收集过柱液→5mL→3mL/min;
淋洗1：纯水→3mL→6mL/min;
淋洗2：甲醇→3mL→4mL/min;
柱干燥：3mL→6mL/min;
洗脱：5%氨化甲醇→6mL→3mL/min;
柱干燥：3mL→6mL/min。
收集洗脱液，蒸干，用流动相初始梯度定容至1mL，过0.20μm微孔滤膜后上机测试。
3 结果以及数据分析
3.1 色谱柱组件选择
在本次试验分析中目标生物农药中存在有叔胺基、仲胺以及醇羟基等极性类型的基团。
项目组比较了非极性柱（WatersBEHC18）、中等极性柱（WatersBEHT3）和强极性柱（WatersBEHHILIC）3种色谱柱对7种新型生物农药的分离效果。发现在C18柱上除鱼藤酮和印楝素有保留外，其他5种物质均没有保留;在T3柱上除井岗霉素没有保留外，其他6种物质均有保留，但个别组分峰形较胖;在HILIC柱上7种物质均有保留，且有比较好的峰形。所以最终选择HILIC柱作为分析柱组件。 3.2 固相萃取机理及小柱的选择
在反相萃取模式下，我们选择了Waters的HLB，Agilent的Plexa、PPL、Focus、ENV和DIKMA的C86种非极性固相萃取小柱作为吸附柱，用浓度为50ng/mL的标准品考察了7种生物农药在酸性、中性和碱性条件下6种小柱对7种生物农药的保留情况（洗脱液为甲醇）。结果发现在3种条件下6种小柱对井岗霉素都没有保留，不能满足方法的要求，但除井岗霉素外，在中性或碱性条件下HLB、Plexa、Focus和ENV这4种小柱对其他物质均有不错的保留。
3.3 正相萃取模式分析
在正相模式下，我们选择了NH4、PSA、FLORISI、PrimeHLB、NH4/Carb、Carb等6种极性吸附小柱，用濃度为50ng/mL的标准品考察了80%乙腈-水和乙腈两种溶液体系中7种生物农药在6种小柱中的保留情况。结果发现除PrimeHLB在80%乙腈-水体系中对7种生物农药有比较好的保留外，其他柱子和体系对井岗霉素都没有保留。这可能与井岗霉素的结构含有大量的醇羟基，极性极大无法洗脱有关。
3.4 样品检测结果分析
自该方法建立以来，成功应用于实验室内部300多批各种水果、蔬菜样品的检测，并多次检出生物农药烟碱残留，检测结果介于0.062～1.41mg/kg间。
4 结束语
本项目研究建立的水果蔬菜中7种新型生物农药残留全自动固相萃取-液质联用检测方法为果蔬中生物农药残留的检测提供了重要支持，为保证食品安全提供了重要保障，值得推广和应用。本检测方法可以配合国家相关部门开展生物农药残留监测的研究并制定相关生物农药残留的限量标准。
参考文献
[1]陈少芳，欧天成，罗轩.QuEChERS-气相色谱法测定果蔬中7种拟除虫菊酯类农药残留量的研究[J].海峡预防医学杂志，2016，22（3）：62-65.
[2]邬阳，郭艳，郭艳琼，etal.高效液相色谱-质谱法测定果蔬中氟虫腈等7种农药残留的方法研究[J].北方农业学报，2017，45（1）：70-75.
[3]谭颖，张琪，赵成，etal.蔬菜水果中的新烟碱类农药残留量与人群摄食暴露健康风险评价[J].生态毒理学报，2016，11（6）：67-81.
[4]陈惠琴，刘佳，蓝梦哲.蔬菜和水果中农残检测前处理技术研究进展[J].轻工科技，2017（6）：4-5.