论文部分内容阅读
目的
构建稳定过表达泛素特异性蛋白酶53(USP53)的食管癌Eca109细胞株。
方法以GE公司购买的含USP53全长序列的质粒作为模板，使用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增出USP53全长基因，将构建好的USP53慢病毒质粒和包装质粒共转染293T细胞获得浓缩慢病毒颗粒，再将慢病毒颗粒感染Eca109细胞，最后通过含有嘌呤霉素的培养基筛选稳定转染细胞株。
结果过表达细胞株中的USP53的mRNA表达量(45.070±0.942)分别与对照组(1.091±0.075)及正常组(1.000±0.023)比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，Western blot实验显示过表达细胞株中标签蛋白HA明显高表达，对照组及正常组未见标签蛋白表达。
结论成功构建人去泛素化酶USP53稳定高表达细胞株。