【摘 要】
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目的探讨长链游离脂肪酸对胎盘滋养细胞线粒体β氧化循环长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)基因启动子区甲基化程度影响，以及对甲基化修饰的时间效应。方法体外培养原代人绒毛滋养细胞及HTR-8/SVneo永久性人滋养细胞，研究组采用长链游离脂肪酸孵育滋养细胞(LC-FFA组)，并以短链游离脂肪酸(SC-FFA组)和中链游离脂肪酸(MC-FFA组)作为不同链长游离脂肪酸对照组，空白对照组无脂肪酸(F-
【机 构】
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100191 北京大学第三医院妇产科,100191 北京大学第三医院妇产科,100191 北京大学第三医院妇产科,中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室,100191 北京大学第三医院妇
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目的探讨长链游离脂肪酸对胎盘滋养细胞线粒体β氧化循环长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)基因启动子区甲基化程度影响，以及对甲基化修饰的时间效应。
方法体外培养原代人绒毛滋养细胞及HTR-8/SVneo永久性人滋养细胞，研究组采用长链游离脂肪酸孵育滋养细胞(LC-FFA组)，并以短链游离脂肪酸(SC-FFA组)和中链游离脂肪酸(MC-FFA组)作为不同链长游离脂肪酸对照组，空白对照组无脂肪酸(F-FFA组)。分别在孵育24、48及72 h收集细胞并提取DNA。在LCHAD基因转录起始位点上游2 000 bp区域内序列预测CpG岛位置，设计甲基化检测位点和引物。采用Sequenom MassArray甲基化DNA定量分析平台检测不同组CpG岛各CpG位点的甲基化程度后进行各甲基化位点和CpG岛的统计学分析。
结果(1)在LCHAD基因转录起始位点上游2 000 bp区域内的17个CpG位点中获得11个位点(65%)的甲基化程度，8个为单独位点，3个为复合位点(－984、－960、－899、－853、－811、－796、－774、－727、－615、－595、－579)。在不同研究组中每个位点的甲基化变化程度各不同，其中－899位点变化最明显。(2)LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度变化分析：①长、中链游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度影响伴随时间的延长呈现升高趋势：LC-FFA组孵育72 h(0.55±0.08)比孵育48 h(0.35±0.12)及24 h(0.31±0.04)均明显升高(P<0.05)，48 h虽比24 h升高，但差异无统计学意义(P>0.05)。MC-FFA组孵育72 h(0.44±0.05)比孵育24 h(0.31±0.04)明显升高(P<0.05)。②不同链长游离脂肪酸在不同作用时间影响LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度比较：LC-FFA组孵育72 h的甲基化程度比MC-FFA、SC-FFA组及F-FFA组的72、48及24 h均明显升高(P<0.05)。 (3)作用72 h游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区11个CpG位点甲基化程度影响比较：在LC-FFA组和MC-FFA组－899位点甲基化程度明显高于其他位点(P<0.05)。(4)长链游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区－899位点甲基化程度影响伴随时间的延长呈现升高趋势(P<0.05)。 LC-FFA组孵育72 h比MC-FFA、SC-FFA组及F-FFA组的72、48及24 h均明显升高(P<0.05)。
结论长链游离脂肪酸比中链和短链游离脂肪酸呈现较大的滋养细胞LCHAD基因启动子区甲基化的修饰作用，并伴随作用时间延长表现出明显的时间依赖效应；甲基化程度改变主要发生在LCHAD基因启动子区－899位点。
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