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摘 要：本实验对寒湿痹片的质量标准进行研究。含量测定方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-水（15∶85）为流动相，检测波长为230nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃；鉴别方法：CMC-Na-G板，以正己烷——醋酸乙酯（9：1）为展开剂，5%香草醛硫酸溶液为显色剂，105度加热，日光下检视。结论：本法简便、准确，可作为寒湿痹片的质量标准。
关键词：寒湿痹片；质量标准；研究
寒湿痹片为糖衣片，除去糖衣后显棕褐色至深棕色；味微涩。寒湿痹片由附子（制）、制川乌、黄芪、桂枝、麻黄、白术（炒）、当归、白芍、威灵仙、木瓜、细辛、甘草（制）组成。 白术（学名：Atractylodes macrocephala），是菊科苍术属的一种植物，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎的功效。白术常用于脾虚食少、腹胀泄泻、自汗、胎动不安等。白芍药（学名：Paeonia sterniana Fletcher in Journ.）也称白花芍药，是毛茛科芍药属植物。白芍常用于血虚阴虚、胸腹胁肋疼痛、胆结石疼痛、泻痢腹痛、自汗易汗盗汗、腓肠肌痉挛等。《本经》记载：“主邪气腹痛，除血痹，破坚积，治寒热疝瘕，止痛，利小便，益气。”芍药甙有抗菌、解热、对抗急性心肌缺血、抑制血小板聚集、抗炎、镇静、镇痛、解痉、抗溃疡、增加冠状动脉流量、改善心肌营养血流、扩张血管、调节血糖的作用[1-5]。本实验对寒湿痹片的质量标准进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器：722可见分光光度计（上海现科分光仪器有限公司）；HS-4恒温浴槽（成都仪器厂）；PM1-300TD超声波清洗机（上海凌初环保仪器有限公司）； L-550台式低速大容量离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；XYG-H帕恩特痕量分析级超纯水机（北京湘顺源科技有限公司）；RE-52AA旋转蒸发仪（东莞康润仪器设备有限公司）；LC-20A岛津高效液相色谱仪 （广州市化兴科学仪器有限公司）；FA1004B万分之一电子分析天平（上海右一仪器有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220 mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：芍药苷。
1.4 试剂：甲醇（北京世纪拓鑫精细化工有限公司）、乙腈（云南云天化国际化工有限公司）、氯仿（济南鑫诺化工有限公司）、正己烷（北京世纪拓鑫精细化工有限公司）、醋酸乙酯（北京世纪拓鑫精细化工有限公司）。
1.5 试药：寒湿痹片。
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6-11]。流动相：乙腈-水（15∶85）为流动相，检测波长：230nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按芍药苷峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含10μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取寒湿痹片适量，捣碎，精密称定，加50毫升流动相超声提取30分钟，过滤，将滤液水浴蒸干，残渣加5毫升流动相溶解，过0.45μm微孔濾膜，滤液作为供试品溶液。
2.4 专属性试验
取附子（制）、制川乌、黄芪、桂枝、麻黄、白术（炒）、当归、威灵仙、木瓜、细辛、甘草（制）药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述实验方法检测，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.43%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量芍药苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含10、20、30、40、50、60微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，芍药苷在10～60μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的寒湿痹片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.42%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
取对照品适量分别精密加入寒湿痹片中，按含量测定进行测定，计算回收率为99.5%，RSD为0.75%。
2.9 样品稳定性试验
取同一批寒湿痹片样品，分别制备供试品和对照品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定芍药苷对照品和样品RSD分别为0.72%，0.71%。结果表明供试品和样品4小时内稳定。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为116？滋g/g、113？滋g/g、112？滋g/g。
3 鉴别
取寒湿痹片适量（约相当于白术药材1g），捣碎，加甲醇50ml回流30分钟，过滤，蒸干，加甲醇2ml溶解即得。对照药材溶液：取白术对照药材1g，同法制备成对照药材溶液。取附子（制）、制川乌、黄芪、桂枝、麻黄、当归、白芍、威灵仙、木瓜、细辛、甘草（制）药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。照薄层色谱法，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各10-20μL，对照品溶液5μL，分别点于CMC-Na-G板，以正己烷--醋酸乙酯（9：1）为展开剂，5%香草醛硫酸溶液为显色剂，105度加热，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。
4 结论
本实验分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于寒湿痹片中芍药苷的含量测定。样品与白术对照药材对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。该鉴别方法专属性强，操作简单，可用于寒湿痹片中白术的鉴别。
参考文献
[1]马伟，马卫东，苗珍花，田建英.芍药苷神经保护作用的实验研究[J].宁夏医科大学学报，2011（02）.
[2]王君萍，韦颖梅，郭梅，李子广.芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2008（03）.
[3]方申存，戴伟，吴昊，束永前，刘平.芍药苷对人胃癌SGC7901/VCR细胞增殖抑制作用及其机制研究[J].南京医科大学学报（自然科学版），2010（05）.
[4]陈广斌，陈华萍，吴铁，林坚涛，崔燎，沈非沉.芍药苷对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织丙二醛、超氧化物歧化酶的影响[J].实用儿科临床杂志，2008（16）.
[5]王丽雯，袁昉，魏伟.重组人白细胞介素对人外周血淋巴细胞功能的影响及芍药苷的作用[J].国临床药理学杂志，2009（02）.
[6]时维静，储明明，谭志静.不同炮制方法对白芍中芍药苷含量的影响[J].中国中医药信息杂志，2008（12）.
[7]程芳，郭玫，张艳明，龙全江.不同炮制品白芍中芍药苷的比较[J].中国民族民间医药，2010（03）.
[8]王瑞，展晓日，王皎，曾昭武.芍药苷在白芍单煎剂和桂枝汤中含量变化的研究[J].山西中医学院学报，2011（03）.
[9]张家富，孟楣，邢安之.HPLC法测定白芍不同饮片中芍药苷的含量[J].安徽医药，2005（08）.
[10]郭富华，黄海燕.不同白芍炮制品中芍药苷含量的比较[J].中国药事，2007（07）.
[11]刘素香，黎阳，丰晶，刘毅，陈常青.不同炮制方法对白芍质量的影响[J].药物评价研究，2010（02）.
关键词：寒湿痹片；质量标准；研究
寒湿痹片为糖衣片，除去糖衣后显棕褐色至深棕色；味微涩。寒湿痹片由附子（制）、制川乌、黄芪、桂枝、麻黄、白术（炒）、当归、白芍、威灵仙、木瓜、细辛、甘草（制）组成。 白术（学名：Atractylodes macrocephala），是菊科苍术属的一种植物，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎的功效。白术常用于脾虚食少、腹胀泄泻、自汗、胎动不安等。白芍药（学名：Paeonia sterniana Fletcher in Journ.）也称白花芍药，是毛茛科芍药属植物。白芍常用于血虚阴虚、胸腹胁肋疼痛、胆结石疼痛、泻痢腹痛、自汗易汗盗汗、腓肠肌痉挛等。《本经》记载：“主邪气腹痛，除血痹，破坚积，治寒热疝瘕，止痛，利小便，益气。”芍药甙有抗菌、解热、对抗急性心肌缺血、抑制血小板聚集、抗炎、镇静、镇痛、解痉、抗溃疡、增加冠状动脉流量、改善心肌营养血流、扩张血管、调节血糖的作用[1-5]。本实验对寒湿痹片的质量标准进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器：722可见分光光度计（上海现科分光仪器有限公司）；HS-4恒温浴槽（成都仪器厂）；PM1-300TD超声波清洗机（上海凌初环保仪器有限公司）； L-550台式低速大容量离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；XYG-H帕恩特痕量分析级超纯水机（北京湘顺源科技有限公司）；RE-52AA旋转蒸发仪（东莞康润仪器设备有限公司）；LC-20A岛津高效液相色谱仪 （广州市化兴科学仪器有限公司）；FA1004B万分之一电子分析天平（上海右一仪器有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220 mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：芍药苷。
1.4 试剂：甲醇（北京世纪拓鑫精细化工有限公司）、乙腈（云南云天化国际化工有限公司）、氯仿（济南鑫诺化工有限公司）、正己烷（北京世纪拓鑫精细化工有限公司）、醋酸乙酯（北京世纪拓鑫精细化工有限公司）。
1.5 试药：寒湿痹片。
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6-11]。流动相：乙腈-水（15∶85）为流动相，检测波长：230nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按芍药苷峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含10μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取寒湿痹片适量，捣碎，精密称定，加50毫升流动相超声提取30分钟，过滤，将滤液水浴蒸干，残渣加5毫升流动相溶解，过0.45μm微孔濾膜，滤液作为供试品溶液。
2.4 专属性试验
取附子（制）、制川乌、黄芪、桂枝、麻黄、白术（炒）、当归、威灵仙、木瓜、细辛、甘草（制）药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述实验方法检测，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.43%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量芍药苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含10、20、30、40、50、60微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，芍药苷在10～60μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的寒湿痹片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.42%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
取对照品适量分别精密加入寒湿痹片中，按含量测定进行测定，计算回收率为99.5%，RSD为0.75%。
2.9 样品稳定性试验
取同一批寒湿痹片样品，分别制备供试品和对照品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定芍药苷对照品和样品RSD分别为0.72%，0.71%。结果表明供试品和样品4小时内稳定。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为116？滋g/g、113？滋g/g、112？滋g/g。
3 鉴别
取寒湿痹片适量（约相当于白术药材1g），捣碎，加甲醇50ml回流30分钟，过滤，蒸干，加甲醇2ml溶解即得。对照药材溶液：取白术对照药材1g，同法制备成对照药材溶液。取附子（制）、制川乌、黄芪、桂枝、麻黄、当归、白芍、威灵仙、木瓜、细辛、甘草（制）药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。照薄层色谱法，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各10-20μL，对照品溶液5μL，分别点于CMC-Na-G板，以正己烷--醋酸乙酯（9：1）为展开剂，5%香草醛硫酸溶液为显色剂，105度加热，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。
4 结论
本实验分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于寒湿痹片中芍药苷的含量测定。样品与白术对照药材对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。该鉴别方法专属性强，操作简单，可用于寒湿痹片中白术的鉴别。
参考文献
[1]马伟，马卫东，苗珍花，田建英.芍药苷神经保护作用的实验研究[J].宁夏医科大学学报，2011（02）.
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[5]王丽雯，袁昉，魏伟.重组人白细胞介素对人外周血淋巴细胞功能的影响及芍药苷的作用[J].国临床药理学杂志，2009（02）.
[6]时维静，储明明，谭志静.不同炮制方法对白芍中芍药苷含量的影响[J].中国中医药信息杂志，2008（12）.
[7]程芳，郭玫，张艳明，龙全江.不同炮制品白芍中芍药苷的比较[J].中国民族民间医药，2010（03）.
[8]王瑞，展晓日，王皎，曾昭武.芍药苷在白芍单煎剂和桂枝汤中含量变化的研究[J].山西中医学院学报，2011（03）.
[9]张家富，孟楣，邢安之.HPLC法测定白芍不同饮片中芍药苷的含量[J].安徽医药，2005（08）.
[10]郭富华，黄海燕.不同白芍炮制品中芍药苷含量的比较[J].中国药事，2007（07）.
[11]刘素香，黎阳，丰晶，刘毅，陈常青.不同炮制方法对白芍质量的影响[J].药物评价研究，2010（02）.