【摘 要】
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[目的]探究环形RNA circ_0036176对心肌纤维化表型的调控作用.[方法]通过RT-qPCR检测人心肌组织(包括18例器官捐赠健康志愿者和28例心力衰竭患者)中circ_0036176及其宿主基因MYO9A的表达水平.利用血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)处理人心房肌成纤维细胞(HAFs),RT-qPCR检测circ_0036176和MYO9A的表达水平.放线菌素D和RNase R处理,鉴定circ_0036176的典型环状结构.使用circ_0036176腺病毒在HAFs中实现充分过表达,mRNA及蛋
【机 构】
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华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006;南方医科大学药学院,广东广州510515;华南理工大学医学院,广东广州510006;南方医科大学第二临床医学院,广东广州510280;广东省心血管
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[目的]探究环形RNA circ_0036176对心肌纤维化表型的调控作用.[方法]通过RT-qPCR检测人心肌组织(包括18例器官捐赠健康志愿者和28例心力衰竭患者)中circ_0036176及其宿主基因MYO9A的表达水平.利用血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)处理人心房肌成纤维细胞(HAFs),RT-qPCR检测circ_0036176和MYO9A的表达水平.放线菌素D和RNase R处理,鉴定circ_0036176的典型环状结构.使用circ_0036176腺病毒在HAFs中实现充分过表达,mRNA及蛋白水平检测纤维化相关基团的表达差异.利用双萤光素酶报告基因实验和RNA反义纯化技术(RAP)筛选可与circ_0036176有效结合的miRNA.利用C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)研究miR-218-5p是否介导circ_0036176对心肌纤维化表型的调节作用.[结果]Circ_0036176在心衰心肌中表达增加(P<0.001),但在Ang-Ⅱ诱导的HAFs纤维化细胞模型中,宿主基因及该circRNA的表达一致下调(P<0.01).放线菌素D和RNase R实验证实circ_0036176具有典型的环形RNA稳定性.在HAFs中充分过表达circ_0036176后,纤维化相关基因表达均有所下降(P<0.05).双萤光素酶报告基因实验与RAP实验证实miR-218-5p与circ_0036176间存在结合作用.mCFs中转染miR-218-5p促进了纤维化相关基团的表达,并可有效抵抗circ_0036176的纤维化抑制作用.[结论]Circ_0036176在心衰病人的心肌组织中表达上调,并可通过吸附miR-218-5p的方式来抑制心肌纤维化.
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