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目的：探讨两种构建EB病毒LMP1基因的shRNA表达载体（pshLMP1）方法的不同，寻找更加稳定方便的靶向shRNA表达载体的构建方式．方法：设计针对EB病毒LMP1基因的特异siRNA编码序列，分别应用传统的双链退火法和新颖的双链PCR法构建pshLMP1，比较两种方法在设计原则、构建方法和鉴定结果上的不同．结果：两种方法均能得到pshLMP1重组质粒，但是双链PCR法构建效率高且不易引起碱基的缺失和突变．结论：双链PCR法构建EB病毒pshLMP1表达载体比传统双链退火法更加稳定，构建成功率较双链