三角紫叶酢浆草ISSR反应体系的建立与优化

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采用正交设计直观分析法,对影响三角紫叶酢浆草ISSR-PCR反应较大的5个因素(Mg2+、Taq酶、引物、模板DNA、dNTP)在5个水平上进行优化实验;从100个随机引物中筛选出适宜的引物,并筛选出其最佳退火温度;最后对反应程序进行优化。由此首次建立了适合三角紫叶酢浆草的ISSR-PCR反应体系:25μL反应液中含10×buffer 2.5μL,Mg2+1.25mmol/L,Taq酶0.9U,引物0.3μmol/L,模板DNA 60~100ng,dNTP 0.25mmol/L。反应程序为:94
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