目的制备具有凝血活性的重组人组织因子(recombinant tissue factor,r-TF)用于构建PT试剂盒。方法将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastorisGS115,转化子经G418抗性筛选后,获得高表达克隆。工程菌在摇瓶中经甲醇诱导,表达r-TF,表达产物经纯化后,鉴定生物活性。结果SDS-PAGE证实表达产物的分子量为37 000~45 000,Western blot证明其为人组织因子衍生物,纯化后,r-TF经脂化后,具有促凝血活性,为研制凝血活酶时间测定试剂盒及研究TF的构效关系创造条件。结论用毕赤酵母高效表达具有活性的rTF,表达量达到182 mg/L。纯化工艺简便易行,蛋白回收率高,纯化后的rTF可用于组装PT测定试剂盒。