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作者简介：张晓春，江西永丰，1981年02月出生，在井冈山大学医学院工作，研究方向:基础医学。
摘要：目的：探讨咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠的抑瘤作用。方法：建立荷瘤H22小鼠移植瘤模型，应用咖啡酸锗腹腔注射给药后，计算抑瘤率以及通过HE染色在光学显微镜下观察其对移植瘤的抑制作用。结果：咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠移植瘤的具有抑制作用。结论：咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠移植瘤具有抑制作用，但最有效的药物剂量需要进一步实验摸索研究。
关键词：咖啡酸锗；H22；抑瘤率
中图分类号：R730.5 文献标识码：A 文章编号：1672-3791(2011)12(c)-0000-00
锗是许多药用植物的成分之一，人参等药用植物富含有机锗,具有独特的保健功能。1971年日本学者浅井一彦[1]发现人参中含有具有广谱药理活性的有机锗,从此有机锗化合物成为了人们寻找有效而低毒的抗癌药物的重要领域之一。本文通过体内实验研究咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠的抑制作用，现报道如下:
1实验材料和方法
1.1材料
1.1.1 动物 近交系昆明种清洁级小鼠50只，雄性，18~22g，一级屏障环境饲养、温度20~24℃、相对湿度40%~60%的环境下完成动物实验，小鼠由江西中医学院实验动物中心提供。
1.1.2 瘤细胞 小鼠肝癌H22细胞株，购自浙江省医学科学肿瘤研究所，实验室常规传代保存。
1.1.3 主要药物及试剂 咖啡酸锗，注射用环磷酰胺，苏木素色精，伊红Y等。
1.2实验方法
1.2.1 建立荷瘤鼠模型 选取传代接种后7~10d、肿瘤生长良好、腹部隆起明显的瘤源小鼠，断椎处死，于超净工作台无菌条件下，从腹腔抽取瘤液，经台盼蓝检验瘤细胞活性>95%，用灭菌生理盐水稀释，调整瘤细胞数至2.28×107个/ml，于每只小鼠右前肢腋下皮下接种0.2ml，形成实体瘤。
1.2.2 实验分组及给药 将接种了肝癌H22细胞的小鼠随机分为生理盐水组[NS,90mg/(kg·d)]、环磷酰胺组[CTX,25mg/(kg·d)]、咖啡酸锗低、中、高剂量组[Caffeicacid Ge,1mg/(kg·d)、2mg/(kg·d)、4mg/(kg·d)]，每组10只。各组小鼠于接种次日进行腹腔注射给药，给药量均为0.2ml/20g，每日给药一次，连续10d。
1.2.3计算抑瘤率 第十一天，处死小鼠后剥离瘤块，按下式计算抑瘤率。
抑瘤率 (％) ＝ ×100％
1.2.4苏木素-伊红染色 HE及光镜下观察 将瘤组织常规HE染色观察。
1.3统计方法 采用SPSS15.0进行统计学处理。
2 结果
2.1 咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠的抑瘤作用（见表1）
表1中数据显示用药前后的小鼠体重各组之间无显著性差异（P﹥0.05）。生理盐水组的平均瘤重为1.41±0.70g，咖啡酸锗低、中、高剂量组的平均瘤重分别为0.55±0.16、0.42±0.13g、0.50±0.17g，与NS组比较，均有显著降低，具有统计学意义（P<0.01）。环磷酰胺组的平均瘤重为0.37±0.10g，与生理盐水组比较也有显著性下降（P<0.01）。咖啡酸锗低、中、高剂量组的抑瘤率分别为61.07％、70.48％、64.31％，均大于30％。
2.2 HE染色观察（见附图Ⅰ）
光学显微镜下观察可以看出NS组瘤细胞生长旺盛、细胞比较密集，核分裂数多，浸润较深，至脂肪、肌层、胸骨以及食管等处，肿瘤组织血管较丰富，坏死范围较小，咖啡酸锗各剂量组以及CTX组上述各指标程度较轻，而细胞退化坏死较严重，尤其是中剂量组和CTX组，与NS组比较有显著性差异。
NS组 瘤细胞生长旺盛，排列密集，可见瘤 CTX组 瘤细胞生长受限，大部分瘤细胞严重细胞浸润脂肪，核分裂多见，坏死较少。 坏死，残存部分瘤细胞团。
低剂量组 瘤细胞中央坏死,细胞生长较稀疏。 中剂量组 瘤细胞大部分固缩，深染，可见残存瘤细胞影。还可见浸润脂肪。
高剂量组 瘤细胞生长稍稀疏，可见浸润到
脂肪组织中，还可见较多炎细胞浸润。
3 讨论
自1971年日本学者发现药物Ge-132具有广谱抗肿瘤活性以来[2], 有机锗化合物抗肿瘤活性的研究得到了空前的发展,大量研究表明有机锗化合物具有明显的抗肿瘤作用[3-4] 。本次实验结果也确证明了咖啡酸锗具有明显的抗肿瘤作用，抑制H22小鼠体内移植瘤的生长。体内抗肿瘤实验发现，咖啡酸锗各剂量组、CTX组与NS组比较，瘤重均有降低，其中低剂量组、中剂量组、CTX组与空白对照组（NS组）比较瘤重均有显著性差异（P<0.01），抑瘤率CTX组及低剂量、中剂量组、高剂量组分别为74%、61.07%、70.48%、64.31%。通过光学显微镜下观察各实验组用药后的情况， NS组瘤细胞生长旺盛、细胞比较密集，核分裂数多，浸润较深，至脂肪、肌层、胸骨以及食管等处，肿瘤组织血管较丰富，坏死范围较小，咖啡酸锗各剂量组以及CTX组上述各指标程度较轻，而细胞退化坏死较严重，尤其是中剂量组和CTX组。从以上结果证明咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠移植瘤具有抑制作用，以中剂量抑瘤率最高，低剂量及高剂量相对低一点，但是最有效的药物剂量需要进一步实验摸索研究。
参考文献
[1] Stanfer M. Investigations in the field of organogermanium chemistry. Erfahrungsheilkunde , 1980 ,29 (4):646-649.
[2] Asai K，Okikawa H.Synthesis of the enantiomerof 4-substituted γ-lactones with known absolute configuration.JP 46 27 690. 1971．
[3] 陈静宏，杨占田，张健，等.有机锗GEM10对黑色素瘤细胞增殖及其与内皮细胞粘连的影响[J].陕西医学杂志，2005，34(2)：131-134．
[4] 陈建新,陈莉,翟玉平,等．含α-氨基酸的新型有机锗化合物的合成与生物活性研究[J]．高等学校化学学报，2006，27(8)：1476-1479．
摘要：目的：探讨咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠的抑瘤作用。方法：建立荷瘤H22小鼠移植瘤模型，应用咖啡酸锗腹腔注射给药后，计算抑瘤率以及通过HE染色在光学显微镜下观察其对移植瘤的抑制作用。结果：咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠移植瘤的具有抑制作用。结论：咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠移植瘤具有抑制作用，但最有效的药物剂量需要进一步实验摸索研究。
关键词：咖啡酸锗；H22；抑瘤率
中图分类号：R730.5 文献标识码：A 文章编号：1672-3791(2011)12(c)-0000-00
锗是许多药用植物的成分之一，人参等药用植物富含有机锗,具有独特的保健功能。1971年日本学者浅井一彦[1]发现人参中含有具有广谱药理活性的有机锗,从此有机锗化合物成为了人们寻找有效而低毒的抗癌药物的重要领域之一。本文通过体内实验研究咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠的抑制作用，现报道如下:
1实验材料和方法
1.1材料
1.1.1 动物 近交系昆明种清洁级小鼠50只，雄性，18~22g，一级屏障环境饲养、温度20~24℃、相对湿度40%~60%的环境下完成动物实验，小鼠由江西中医学院实验动物中心提供。
1.1.2 瘤细胞 小鼠肝癌H22细胞株，购自浙江省医学科学肿瘤研究所，实验室常规传代保存。
1.1.3 主要药物及试剂 咖啡酸锗，注射用环磷酰胺，苏木素色精，伊红Y等。
1.2实验方法
1.2.1 建立荷瘤鼠模型 选取传代接种后7~10d、肿瘤生长良好、腹部隆起明显的瘤源小鼠，断椎处死，于超净工作台无菌条件下，从腹腔抽取瘤液，经台盼蓝检验瘤细胞活性>95%，用灭菌生理盐水稀释，调整瘤细胞数至2.28×107个/ml，于每只小鼠右前肢腋下皮下接种0.2ml，形成实体瘤。
1.2.2 实验分组及给药 将接种了肝癌H22细胞的小鼠随机分为生理盐水组[NS,90mg/(kg·d)]、环磷酰胺组[CTX,25mg/(kg·d)]、咖啡酸锗低、中、高剂量组[Caffeicacid Ge,1mg/(kg·d)、2mg/(kg·d)、4mg/(kg·d)]，每组10只。各组小鼠于接种次日进行腹腔注射给药，给药量均为0.2ml/20g，每日给药一次，连续10d。
1.2.3计算抑瘤率 第十一天，处死小鼠后剥离瘤块，按下式计算抑瘤率。
抑瘤率 (％) ＝ ×100％
1.2.4苏木素-伊红染色 HE及光镜下观察 将瘤组织常规HE染色观察。
1.3统计方法 采用SPSS15.0进行统计学处理。
2 结果
2.1 咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠的抑瘤作用（见表1）
表1中数据显示用药前后的小鼠体重各组之间无显著性差异（P﹥0.05）。生理盐水组的平均瘤重为1.41±0.70g，咖啡酸锗低、中、高剂量组的平均瘤重分别为0.55±0.16、0.42±0.13g、0.50±0.17g，与NS组比较，均有显著降低，具有统计学意义（P<0.01）。环磷酰胺组的平均瘤重为0.37±0.10g，与生理盐水组比较也有显著性下降（P<0.01）。咖啡酸锗低、中、高剂量组的抑瘤率分别为61.07％、70.48％、64.31％，均大于30％。
2.2 HE染色观察（见附图Ⅰ）
光学显微镜下观察可以看出NS组瘤细胞生长旺盛、细胞比较密集，核分裂数多，浸润较深，至脂肪、肌层、胸骨以及食管等处，肿瘤组织血管较丰富，坏死范围较小，咖啡酸锗各剂量组以及CTX组上述各指标程度较轻，而细胞退化坏死较严重，尤其是中剂量组和CTX组，与NS组比较有显著性差异。
NS组 瘤细胞生长旺盛，排列密集，可见瘤 CTX组 瘤细胞生长受限，大部分瘤细胞严重细胞浸润脂肪，核分裂多见，坏死较少。 坏死，残存部分瘤细胞团。
低剂量组 瘤细胞中央坏死,细胞生长较稀疏。 中剂量组 瘤细胞大部分固缩，深染，可见残存瘤细胞影。还可见浸润脂肪。
高剂量组 瘤细胞生长稍稀疏，可见浸润到
脂肪组织中，还可见较多炎细胞浸润。
3 讨论
自1971年日本学者发现药物Ge-132具有广谱抗肿瘤活性以来[2], 有机锗化合物抗肿瘤活性的研究得到了空前的发展,大量研究表明有机锗化合物具有明显的抗肿瘤作用[3-4] 。本次实验结果也确证明了咖啡酸锗具有明显的抗肿瘤作用，抑制H22小鼠体内移植瘤的生长。体内抗肿瘤实验发现，咖啡酸锗各剂量组、CTX组与NS组比较，瘤重均有降低，其中低剂量组、中剂量组、CTX组与空白对照组（NS组）比较瘤重均有显著性差异（P<0.01），抑瘤率CTX组及低剂量、中剂量组、高剂量组分别为74%、61.07%、70.48%、64.31%。通过光学显微镜下观察各实验组用药后的情况， NS组瘤细胞生长旺盛、细胞比较密集，核分裂数多，浸润较深，至脂肪、肌层、胸骨以及食管等处，肿瘤组织血管较丰富，坏死范围较小，咖啡酸锗各剂量组以及CTX组上述各指标程度较轻，而细胞退化坏死较严重，尤其是中剂量组和CTX组。从以上结果证明咖啡酸锗对荷瘤H22小鼠移植瘤具有抑制作用，以中剂量抑瘤率最高，低剂量及高剂量相对低一点，但是最有效的药物剂量需要进一步实验摸索研究。
参考文献
[1] Stanfer M. Investigations in the field of organogermanium chemistry. Erfahrungsheilkunde , 1980 ,29 (4):646-649.
[2] Asai K，Okikawa H.Synthesis of the enantiomerof 4-substituted γ-lactones with known absolute configuration.JP 46 27 690. 1971．
[3] 陈静宏，杨占田，张健，等.有机锗GEM10对黑色素瘤细胞增殖及其与内皮细胞粘连的影响[J].陕西医学杂志，2005，34(2)：131-134．
[4] 陈建新,陈莉,翟玉平,等．含α-氨基酸的新型有机锗化合物的合成与生物活性研究[J]．高等学校化学学报，2006，27(8)：1476-1479．