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目的：构建抑制增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达的慢病毒表达载体。方法：选取EGFP的19nt特异性序列，构建针对EGFP的shRNA，用Xba Ⅰ、XhoⅠ双酶切后定向克隆到慢病毒表达载体pLL3．7中，用包装的慢病毒液感染细胞，用荧光显微镜观察EGFP基因在不同细胞的表达情况。结果：干扰序列正确克隆至含U6启动子的慢病毒载体中，慢病毒感染Hela及J558L细胞后，可有效抑制细胞中EGFP的表达。结论：构建的慢病毒系统有效抑制了EGFP的表达，为后续的基因功能研究提供了有利工具。