目的 :探讨联合应用无血清微球培养技术及磁珠分离技术从新鲜胃癌组织中分离与鉴定人胃癌干细胞的方法。方法 :利用新鲜胃癌组织获得胃癌原代培养细胞,行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)免疫组织化学鉴定证实为胃癌细胞后,体外进一步行无血清微球体培养获得胃癌微球体细胞;采用免疫荧光法检测胃癌球体细胞中CD44的表达,并以CD44为标志物对胃癌球体细胞进行免疫磁珠分选;将分选出的CD44+细胞接种SCID小鼠,观察移植瘤的生长情况,HE染色观察移植瘤组织中细胞形态结构的情况,免疫组织化学法检测CEA和CD44的表达情况。结果 :17例新鲜胃癌组织中成功培养出高、中和低分化程度胃癌细胞各1例;以无血清微球体培养法培养获得胃癌微球体细胞中CD44高表达;分选获得的CD44+细胞更早更快形成移植瘤,移植瘤组织见干细胞的自我更新及分化特性。结论 :利用无血清微球体培养法结合以CD44为标志物的免疫磁珠分离技术可以高效募集新鲜胃癌组织中的肿瘤干细胞。