【摘 要】
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目的:研究宫颈癌C33A细胞中HPV16 E6蛋白过表达对内质网应激-自噬反应的影响。方法:构建HPV16 E6的真核表达载体pc DNA3.1(-)-HPV16 E6,转染C33A细胞[pc DNA3.1(-)-HPV16 E6
【机 构】
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山西医科大学,山西医学科学院山西大医院妇产科
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目的:研究宫颈癌C33A细胞中HPV16 E6蛋白过表达对内质网应激-自噬反应的影响。方法:构建HPV16 E6的真核表达载体pc DNA3.1(-)-HPV16 E6,转染C33A细胞[pc DNA3.1(-)-HPV16 E6组],同时设空载体转染组[pc DNA3.1(-)组]和空白对照组(C33A组),荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测其C33A细胞中HPV16 E6 m RNA及蛋白表达的变化,及其对自噬蛋白Beclin 1、LC3Ⅱ、内质网应激标记蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长的变化;流式细胞仪检测细胞自噬的变化。结果:成功构建了HPV16 E6的真核表达载体pc DNA3.1(-)-HPV16 E6,其可以使C33A细胞中HPV16 E6 m RNA及蛋白表达增加;HPV16 E6在C33A中过表达可促进肿瘤细胞的生长,pc DNA3.1(-)-HPV16 E6转染后C33A的自噬率较pc DNA3.1(-)组和C33A组增高,差异有统计学意义(P<0.05);HPV16 E6过表达使Beclin 1、LC3Ⅱ和GRP78蛋白表达增加,阻断内质网应激通路后GRP78表达减少,细胞自噬率降低。结论:内质网应激-自噬反应在HPV16感染导致宫颈癌的过程中具有重要作用,这为宫颈癌的基因治疗提供了新靶点。
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