【摘 要】
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目的构建人视黄醇结合蛋白4（RBP4）cDNA全长的原核表达质粒（pET-28a（＋）-hRBP4）并在大肠杆菌中高效表达。方法取成人正常肝脏组织提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收,构建克隆载体pMD-R
【机 构】
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安徽医科大学生化教研室,合肥妇幼保健院
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目的构建人视黄醇结合蛋白4（RBP4）cDNA全长的原核表达质粒（pET-28a（＋）-hRBP4）并在大肠杆菌中高效表达。方法取成人正常肝脏组织提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收,构建克隆载体pMD-RBP4,设计带酶切位点BamHⅠ和HindⅢ的引物,PCR后酶切插入pET-28a（＋）中,转化BL21（DE3）,IPTG诱导表达,Western blot检测其特异表达,并对rhRBP4诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化;用镍亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定其纯度。结
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