【摘 要】
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目的建立基于报告基因和雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)亚型信号通路的药物筛选模型,以期发现ERβ亚型激动剂。方法构建带有雌激素应答序列(estrogen responsive el
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,东京大学老年医学系,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,军事医学科学院放射与辐射医学研究所
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目的建立基于报告基因和雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)亚型信号通路的药物筛选模型,以期发现ERβ亚型激动剂。方法构建带有雌激素应答序列(estrogen responsive elem ent,ERE)靶序列和报告基因的诱导性表达载体pTAL-ERE-SEAP,并将其转入人胚肾(HEK293)细胞中,筛选报告基因分泌型碱性磷酸酶(secretedalkaline phosphatase,SEAP)表达受雌二醇(17β-estrad iol,E2)诱导的阳性克隆。选取相关核受体配体进行模型的特异性考察,同时考察模型的稳定性及时效量效关系,以及免疫细胞化学染色鉴定转染后ERβ的表达情况。利用此模型对本实验室样品库中的2 622个化合物进行筛选。结果转染pTAL-ERE-SEAP的HEK293细胞中,SEAP报告基因的表达受E2的诱导并呈剂量与时间依赖关系,E2对阳性克隆细胞无增殖作用,本模型的Z′因子值为0.7,免疫细胞化学染色结果表明,转染后ERβ表达、地塞米松以及其他配体的诱导表达率低。结论利用此模型通过测定SEAP报告基因的诱导表达水平可筛选ERβ亚型激动剂。
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