了解强制泛素化乙型肝炎核心抗原(ubiquitination of hepatitis B virus core antigen，Ub-HBcAg)对树突状细胞(dendritic cell，DC)自噬的影响，以及调节细胞自噬对DC抗原提呈功能和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)反应的作用。
方法构建Ub-HBcAg慢病毒载体(lentiviral vector，LV，即为LV-Ub-HBcAg组)、无泛素化的乙型肝炎核心抗原(hepatitis B virus core antigen, HBcAg)重组慢病毒载体(LV-HBcAg组)和空载质粒慢病毒载体(LV组)，并分别转染至DC2.4细胞，设置空白对照组(NC组)。采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白P62、微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3 beta，LC3B)、自噬相关蛋白5(autophagy related 5，ATG5)和自噬效应蛋白1(Beclin-1)的蛋白质相对表达量。流式细胞术检测DC表面共刺激分子CD86、CD80、主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)-Ⅱ的表达。CCK-8法检测T淋巴细胞增殖。非放射性的乳酸脱氢酶释放实验检测特异性CTL杀伤活性。统计学分析采用独立样本t检验。
结果NC组自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Beclin-1和ATG5蛋白质相对表达量分别为0.445±0.076、0.522±0.026、0.761±0.038，分别低于LV-Ub-HBcAg组的0.926±0.021、0.919±0.016、1.451±0.028，而NC组P62相对表达量为1.875±0.016，高于LV-Ub-HBcAg组的0.647±0.121，差异均有统计学意义(t＝6.102、9.842、17.490、10.590，均P<0.01)。LV-Ub-HBcAg组DC的表面共刺激分子CD86(75.51%)、CD80(83.35%)和MHC-Ⅱ(66.66%)的表达也较高，NC组分别为8.03%、7.49%、0.04%。LV-Ub-HBcAg组特异性CTL杀伤率为(65.310±2.091)%，高于NC组的(14.400±0.497)%和LV-HBcAg组的(54.870±1.443)%，差异均有统计学意义(t＝23.690、4.111，均P<0.05)。
结论Ub-HBcAg可促进DC自噬，并上调DC表面共刺激分子的表达，有利于DC成熟活化，并在泛素化作用下能更有效地激活T淋巴细胞功能，产生强烈的特异性CTL反应。