自行加工的非对称流场流分离仪器对蛋白质分离的应用研究

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目的设计并加工一套针对生物大分子分离的非对称流场流分离(asymmetric flow field-flow fractionation,As Fl FFF或AF4)仪器,对仪器性能进行初步研究,为下一步实际样品的分离提供依据和参考经验。方法为了解决样品聚焦(focus)问题,自行研究了一种新的聚焦方式。以标准牛血清白蛋白和乙醇脱氢酶作为混合样品,对仪器性能进行验证。并通过改变进样/聚焦时间、横向流动速度(cross-in flow)和横向流出速度(cross-out flow),考察各因素对分离效果(分离度R表示)的影响。结果混合蛋白的分离度分别随聚焦时间的减少和横向流动速度的增加而增加,而横向流出速度的影响并不显著。结论该非对称流场流分离仪器已基本实现对混合蛋白的分离,预计可用于更为复杂的样品分离。 Objective To design and process an asymmetric flow field-flow fractionation (As Fl FFF or AF4) instrument for the separation of biological macromolecules, and to conduct a preliminary study on the performance of the instrument to provide the basis for the next actual sample separation And reference experience. Methods In order to solve the problem of sample focus, a new focusing method was studied. The standard bovine serum albumin and alcohol dehydrogenase as a mixed sample, the instrument performance verification. The effects of various factors on the separation efficiency (resolution R) were examined by changing the injection / focusing time, cross-in flow and cross-out flow. As a result, the resolution of the mixed protein increased with the decrease of the focusing time and the increase of the lateral flow rate respectively, but the influence of the lateral flow velocity was not significant. Conclusion The asymmetric flow field flow separation apparatus has basically realized the separation of mixed proteins and is expected to be used for more complicated sample separation.
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