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摘要：目的 建立康妇炎软胶囊赤芍中芍药苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱Diamosil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），检测波长230 nm，流速1 mL/min，进样量为10 ?L。结果 芍药苷的线性范围为0.098 4～1.230 ?g（r=0.999 3），平均加样回收率为100.30%，RSD=0.82%（n=6）。结论 本法准确、简便，重复性好，可作为康妇炎软胶囊的质量控制方法。
关键词：高效液相色谱；芍药苷；康妇炎软胶囊；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0052-02
康妇炎软胶囊由蒲公英、败酱草、薏苡仁、赤芍、苍术、当归、川芎、香附、延胡索（制）、泽泻、白花蛇舌草等11味药材组成，具有清热解毒、化瘀行滞、除湿止带等功效，用于月经不调、痛经、附件炎、阴道炎、子宫内膜炎及盆腔炎等妇科炎症。虽然本方其他剂型有关赤芍苷的定量测定研究已有文献报道，但经参考有关文献方法[1-3]进行试验，发现其色谱条件并不适用。因此，我们系统研究了高效液相色谱法（HPLC）对本方主药赤芍中芍药苷进行含量测定的方法，重点是流动相的筛选和进样量的确定，以建立康妇炎软胶囊的质量控制方法。
1 仪器与试药
HPLC仪：美国科学系统公司SSI，天津兰博公司；电子天平：梅特勒-托利多AL204型；超声波仪：HS3120型。
芍药苷对照品：购自中国药品生物制品检定所（批号110736-200423）。康妇炎软胶囊：内蒙古奥特奇蒙药股份有限公司呼和浩特金山药厂制备（批号20050616、20050617、20050618、20050725、20050726、20050727）。乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备
取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.492 mg的对照品储备液，精密量取对照品储备液，加甲醇制成每1 mL含0.049 2 mg的对照品溶液。
2.2 供试品溶液制备
取康妇炎软胶囊内容物（批号20050618）1.0 g，加入甲醇25 mL，精密称定重量，水浴加热使溶散，超声处理（频率40 kHz，功率120 W）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，离心分离，取上层清液，0.45 ?m滤膜滤过，即得。
2.3 阴性对照溶液制备
取不含赤芍的阴性样品，按“2.2”项下方法制备，即得。
2.4 检测波长的确定
取芍药苷对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行扫描，发现芍药苷在230 nm处有最大吸收，且无干扰，确定230 nm作为检测波长。
2.5 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱：Diamosil C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；流速：1 mL/min；检测波长：230 nm；进样量：10 ?L。在上述色谱条件下，芍药苷与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论板数大于8 000，色谱图见图1。
2.6 线性关系考察
分别取“2.1”项下对照品溶液2、5、10、15、20、25 ?L进样，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，进样量（?g）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=618 905X-7 208.1，r=0.999 3，结果表明芍药苷在0.098 4～1.230 ?g范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验
在上述色谱条件下，取同一供试品溶液连续进样6次，测得芍药苷峰面积RSD=0.84%。表明精密度良好。
2.8 重复性试验
取同一批样品（批号20050618），按“2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，在上述色谱条件下测定。结果芍药苷平均含量为2.51 mg/g，RSD=1.61%。表明本法重复性良好。
2.9 稳定性试验
在上述色谱条件下，取“2.2”项下供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，测得芍药苷峰面积RSD=1.33%，表明供试品溶液在10 h内稳定。
2.10 加样回收率试验
精密称取已知芍药苷含量的康妇炎软胶囊内容物（批号20050618）6份，每份0.5 g，分别精密加入芍药苷对照品溶液13.1 mL，按“2.2”项下方法操作，即得待测溶液。在上述色谱条件下进样测定，计算回收率及其RSD。结果见表1。
2.11 样品含量测定
取6批样品，每批2份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，取供试品溶液10 ?L注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标一点法测定康妇炎软胶囊中芍药苷含量。结果见表2。
3 讨论
本方所含药味多达11种，活性成分种类复杂，对定量检测造成很大困难。本研究曾选择蒲公英中绿原酸、当归中阿魏酸为指标成分进行含量测定的研究，均因其他成分干扰严重，无法满足定量要求。本试验经系统研究，尤其是流动相的组分和配比的详细筛选，确定本方主成分之一赤芍中的芍药苷可以满足检测要求，因此，选择芍药苷作为指标性成分进行含量测定研究。
试验研究发现，当进样量大于10 ?L时，芍药苷峰形的对称性较差，拖尾较严重，而采用10 ?L进样时，芍药苷的峰形好、无拖尾，故选择进样量为10 ?L。
为确保芍药苷被充分提出，本研究比较了几种提取方法，发现以超声处理效果最好，为保证尽可能完全地将所需成分提出而又不致因超声处理时间过长而造成对成分的破坏，对超声提取时间进行了比较，发现超声提取30 min后芍药苷提出量几无变化，故确定超声提取时间为30 min。
参考文献：
[1] 周静波，郭力，曾冬，等.康妇炎胶囊质量标准研究[J].药物鉴定，2009， 18（9）：24-26.
[2] 辛永洁，李晔，党秋萍.HPLC法测定康妇炎片中芍药苷的含量[J].西北药学杂志，2007，10（5）：246-247.
[3] 蒋爱波，孙代华，刘焱文.高效液相色谱法测定康妇炎颗粒中芍药苷的含量[J].湖北中医杂志，2006，28（9）：53-54.
（收稿日期：2012-11-28，编辑：陈静）
关键词：高效液相色谱；芍药苷；康妇炎软胶囊；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0052-02
康妇炎软胶囊由蒲公英、败酱草、薏苡仁、赤芍、苍术、当归、川芎、香附、延胡索（制）、泽泻、白花蛇舌草等11味药材组成，具有清热解毒、化瘀行滞、除湿止带等功效，用于月经不调、痛经、附件炎、阴道炎、子宫内膜炎及盆腔炎等妇科炎症。虽然本方其他剂型有关赤芍苷的定量测定研究已有文献报道，但经参考有关文献方法[1-3]进行试验，发现其色谱条件并不适用。因此，我们系统研究了高效液相色谱法（HPLC）对本方主药赤芍中芍药苷进行含量测定的方法，重点是流动相的筛选和进样量的确定，以建立康妇炎软胶囊的质量控制方法。
1 仪器与试药
HPLC仪：美国科学系统公司SSI，天津兰博公司；电子天平：梅特勒-托利多AL204型；超声波仪：HS3120型。
芍药苷对照品：购自中国药品生物制品检定所（批号110736-200423）。康妇炎软胶囊：内蒙古奥特奇蒙药股份有限公司呼和浩特金山药厂制备（批号20050616、20050617、20050618、20050725、20050726、20050727）。乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备
取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.492 mg的对照品储备液，精密量取对照品储备液，加甲醇制成每1 mL含0.049 2 mg的对照品溶液。
2.2 供试品溶液制备
取康妇炎软胶囊内容物（批号20050618）1.0 g，加入甲醇25 mL，精密称定重量，水浴加热使溶散，超声处理（频率40 kHz，功率120 W）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，离心分离，取上层清液，0.45 ?m滤膜滤过，即得。
2.3 阴性对照溶液制备
取不含赤芍的阴性样品，按“2.2”项下方法制备，即得。
2.4 检测波长的确定
取芍药苷对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行扫描，发现芍药苷在230 nm处有最大吸收，且无干扰，确定230 nm作为检测波长。
2.5 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱：Diamosil C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；流速：1 mL/min；检测波长：230 nm；进样量：10 ?L。在上述色谱条件下，芍药苷与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论板数大于8 000，色谱图见图1。
2.6 线性关系考察
分别取“2.1”项下对照品溶液2、5、10、15、20、25 ?L进样，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，进样量（?g）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=618 905X-7 208.1，r=0.999 3，结果表明芍药苷在0.098 4～1.230 ?g范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验
在上述色谱条件下，取同一供试品溶液连续进样6次，测得芍药苷峰面积RSD=0.84%。表明精密度良好。
2.8 重复性试验
取同一批样品（批号20050618），按“2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，在上述色谱条件下测定。结果芍药苷平均含量为2.51 mg/g，RSD=1.61%。表明本法重复性良好。
2.9 稳定性试验
在上述色谱条件下，取“2.2”项下供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，测得芍药苷峰面积RSD=1.33%，表明供试品溶液在10 h内稳定。
2.10 加样回收率试验
精密称取已知芍药苷含量的康妇炎软胶囊内容物（批号20050618）6份，每份0.5 g，分别精密加入芍药苷对照品溶液13.1 mL，按“2.2”项下方法操作，即得待测溶液。在上述色谱条件下进样测定，计算回收率及其RSD。结果见表1。
2.11 样品含量测定
取6批样品，每批2份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，取供试品溶液10 ?L注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标一点法测定康妇炎软胶囊中芍药苷含量。结果见表2。
3 讨论
本方所含药味多达11种，活性成分种类复杂，对定量检测造成很大困难。本研究曾选择蒲公英中绿原酸、当归中阿魏酸为指标成分进行含量测定的研究，均因其他成分干扰严重，无法满足定量要求。本试验经系统研究，尤其是流动相的组分和配比的详细筛选，确定本方主成分之一赤芍中的芍药苷可以满足检测要求，因此，选择芍药苷作为指标性成分进行含量测定研究。
试验研究发现，当进样量大于10 ?L时，芍药苷峰形的对称性较差，拖尾较严重，而采用10 ?L进样时，芍药苷的峰形好、无拖尾，故选择进样量为10 ?L。
为确保芍药苷被充分提出，本研究比较了几种提取方法，发现以超声处理效果最好，为保证尽可能完全地将所需成分提出而又不致因超声处理时间过长而造成对成分的破坏，对超声提取时间进行了比较，发现超声提取30 min后芍药苷提出量几无变化，故确定超声提取时间为30 min。
参考文献：
[1] 周静波，郭力，曾冬，等.康妇炎胶囊质量标准研究[J].药物鉴定，2009， 18（9）：24-26.
[2] 辛永洁，李晔，党秋萍.HPLC法测定康妇炎片中芍药苷的含量[J].西北药学杂志，2007，10（5）：246-247.
[3] 蒋爱波，孙代华，刘焱文.高效液相色谱法测定康妇炎颗粒中芍药苷的含量[J].湖北中医杂志，2006，28（9）：53-54.
（收稿日期：2012-11-28，编辑：陈静）