【摘 要】
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以马乳酒样乳杆菌ZW3基因组为模板,PCR扩增得到乳糖酶中Lac L、Lac M两个大小亚基片段,经Eco RI和Sna BI双酶切后,分别连接p PIC9K质粒,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并验证
【机 构】
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天津科技大学食品工程与生物技术学院
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31171629);天津科技大学大学生实验室创新基金项目(1414A303)
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以马乳酒样乳杆菌ZW3基因组为模板,PCR扩增得到乳糖酶中Lac L、Lac M两个大小亚基片段,经Eco RI和Sna BI双酶切后,分别连接p PIC9K质粒,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并验证其核苷酸序列正确。将重组质粒p PIC9K-Lac L、p PIC9K-Lac M分别电转化毕赤酵母GS115,构建p PIC9K-Lac L-GS115重组子和p PIC9K-Lac M-GS115重组子,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/m L,具有多拷贝基因的重组子。经反转录PCR验证,c DNA上存在Lac L片段,并可检测到乳糖酶酶活达到1.17 U/m L;p PIC9K-Lac M-GS115重组子诱导表达72 h后的发酵液上清经SDS蛋白电泳检测到目的条带。
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