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摘要[目的]筛选出适宜龙牙百合花粉生活力的测定及贮藏的方法。[方法]试验采用醋酸洋红等4种常用的花粉活力测定方法，对龙牙百合花粉生活力进行测定；同时对保持花粉生活力的贮藏方法进行研究。[结果]试验表明，以醋酸洋红法测定龙牙百合花粉生活力效果最好，能较清晰地观察到花粉染色状况；在所研究的11种花粉贮藏方法中，-20 ℃干燥法和-67 ℃干燥1～3 h均较有利于保持百合花粉活力。[结论]研究可为龙牙百合花粉生活力的测定及花粉贮藏育种提供实用可行的方法。
关键词龙牙百合；花粉；生活力；贮藏
中图分类号S682.2文献标识码A文章编号0517-6611（2014）14-04404-01
Study on Vitality Measurement and Storing Methods of Lilium brownii var. viridulum in Wanzai County
LI Rungen et al（Department of Life Science and Resource Environment， Yichun University， Yichun， Jiangxi 336000）
Abstract[Objective] To select proper method for determination and storage of Lilium brownie pollen vitality. [Method] Four kinds of common determination method for pollen vitality were adopted to determine the pollen vitality of Lilium brownie； the storage method was studied. [Result] Results show that acetic acid magenta was the best and can clearly observe pollen dyeing conditions； Preserve among the eleven pollens storing methods， - 20 ℃ temperature drying and - 67 ℃ drying 1-3 h are the favorable methods for preserving pollen vitalities. [Conclusion] The study can provide feasible method for determination of Lilium brownie pollen vitality and pollen storage breeding.
Key wordsLilium brownii var. viridulum； Pollen； Vitalities； Storage
江西萬载有500多年食用百合种植的历史，是我国的三大百合基地之一，万载百合产品是历代贡品。江西龙牙百合公司的“龙牙百合”商标被认定为“江西省著名商标”，龙牙公司、千年公司的百合产品均获得“绿色食品”认证。目前龙牙百合产品已畅销日本、韩国、西欧等地，在国际国内享有盛誉，市场前景十分广阔。但目前万载龙牙百合生产上存在着栽培品种退化严重、病害发生严重等问题[1-2]，亟需培育优良百合新品种。
当前育成的百合新品种中，大部分采用常规杂交育种方法。在做杂交之前，熟悉掌握亲本花粉的生活力，是每个育种工作者的首要工作。许多学者对百合花粉生活力测定及贮藏方法进行了研究[3-4]，但是百合种类丰富，不同种和品种的百合花粉生活力测定及贮藏方法有所不同， 目前万载龙牙百合的花粉生活力测定方法及贮藏方法还未见报道。笔者采用醋酸洋红等方法对龙牙百合花粉生活力进行测定，拟选出适宜龙牙百合花粉生活力的测定方法；同时对保持花粉生活力的贮藏方法进行研究，以期为龙牙百合育种提供实用的花粉贮藏方法。
1材料与方法
1.1材料试验选用江西省万载县白水乡百合基地栽培的龙牙百合为供试材料。
1.2花粉生活力测定方法采用醋酸洋红法[5]、氯化三苯基四氮唑法（TTC法）、过氧化物酶测定法、碘-碘化钾法[3]测定龙牙百合花粉的生活力。
1.3花粉的贮藏方法采用常温贮藏、常温干燥贮藏、低温贮藏、低温干燥贮藏、超低温贮藏等11种贮藏方法进行对比试验，采用醋酸洋红法定期测定花粉的生活力。在龙牙百合开花时，选健壮植株的优质花朵，用镊子取花药，用硫酸纸将花药包好，分成适量等份。
1.3.1高温贮藏法。在37 ℃条件下，将39瓶花粉放入无干燥剂的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.2高温干燥贮藏法。在37 ℃条件下，将39瓶花粉放入有干燥剂（适量硅胶）的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.3常温贮藏法。在25 ℃左右条件下，将39瓶花粉放入无干燥剂的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.4常温干燥贮藏法。在25 ℃左右条件下，将39瓶花粉放入有干燥剂（适量硅胶）的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.5低温贮藏法。在5 ℃条件下，将39瓶花粉放入无干燥剂的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.6低温干燥贮藏法。在5 ℃条件下，将39瓶花粉放入有干燥剂（适量硅胶）的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.7-20 ℃贮藏法。在-20 ℃条件下，将39瓶花粉放入无干燥剂的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.8-20 ℃干燥贮藏法。在-20 ℃条件下，将39瓶花粉放入有干燥剂（适量硅胶）的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。 1.3.9超低温干燥贮藏法。用1.5 ml冻存管每管约装1/3管，放于干燥器内，以适量硅胶干燥不同时间（1、2、3 h）后，将冻存管放入液氮中，再放入-67 ℃的超低温冰箱存储。
1.4测定项目及时间贮藏的花粉生活力测定分别在第1天、第3天、第5天、第7天、第10天、第15天、第20天、第30天、第40天、第60天、第105天、第200天、第300天进行。
2结果与分析
2.1不同方法测定龙牙百合花粉生活力结果分析由表1可知，采用氯化三苯基四氮唑法、过氧化物酶测定法、碘-碘化钾法和醋酸洋红法4种方法测得龙牙百合花粉生活力差异有相似的趋势，其中醋酸洋红法方法较简便且染色易分
辨，效果较好。
2.2不同储藏方法对龙牙百合花粉生活力的影响采用醋酸洋红法测定花粉生活力，进行龙牙百合花粉贮藏方法的研究。由图1和表2可见，在所有的贮藏方法中，花粉的生活力随贮藏天数的增加而下降。其中干燥贮藏法優于非干燥贮藏法，低温贮藏优于常温贮藏处理，这与前人研究结果相符[3]；常温贮藏又优于高温贮藏处理，在-20 ℃贮藏法和-67 ℃干燥贮藏法试验中，-20 ℃干燥贮藏法明显优于前面7种贮藏法，超低温干燥1、2和3 h 贮藏法又明显优于-20 ℃干燥贮藏法，-20 ℃干燥贮藏法和超低温（-67 ℃）干燥1、2和3 h 贮藏法均可贮藏龙牙百合花粉300 d，能较好地解决百合花期不遇问题。
图1不同储藏方法对龙牙百合花粉生活力的影响
表2不同低温干燥方法贮藏龙牙百合花粉生活力情况%
处理时间第60天第105天第300天低温（5 ℃）干燥法22.2624.590.00-20 ℃干燥法59.2652.5350.90超低温干燥1 h法57.3362.4360.20超低温干燥2 h法81.3876.9273.59超低温干燥3 h法83.4475.2974.80
3讨论
在百合杂交育种过程中，杂交父本花粉的生活力是应该考虑的重要因素之一。试验结果表明，龙牙百合花粉生活力高；-20 ℃干燥法和-67 ℃干燥1～3 h均有利于保持百合花粉活力，-20 ℃干燥法和-67 ℃干燥1～3 h能否长久保存龙牙百合花粉活力，有待于进一步的研究。
参考文献
[1] 潘其辉，朱业斌，丁益清.万载县百合产业现状与发展对策[J].安徽农业科学， 2013，41（15）：6969-6970.
[2] 邹一平，晏文武，周 蓉.食用百合枯萎病综合防治研究[J].安徽农业科学， 2005， 33（12）：2294-2295.
[3] 赵兴华，张道旭，印东生，等.百合花粉生活力测定和贮藏方法研究[J].北方园艺， 2009（2）：172-175.
[4] 时婷婷，张桂玲，温四民，等.百合花粉超低温保存方法研究[J].北方园艺， 2013（3）：64-66.
[5] 周桂雪，李克虎，张线线，等.亚洲百合品种倍性、花粉育性及其杂交研究[J].园艺学报， 2011，38（4）：733-739.
关键词龙牙百合；花粉；生活力；贮藏
中图分类号S682.2文献标识码A文章编号0517-6611（2014）14-04404-01
Study on Vitality Measurement and Storing Methods of Lilium brownii var. viridulum in Wanzai County
LI Rungen et al（Department of Life Science and Resource Environment， Yichun University， Yichun， Jiangxi 336000）
Abstract[Objective] To select proper method for determination and storage of Lilium brownie pollen vitality. [Method] Four kinds of common determination method for pollen vitality were adopted to determine the pollen vitality of Lilium brownie； the storage method was studied. [Result] Results show that acetic acid magenta was the best and can clearly observe pollen dyeing conditions； Preserve among the eleven pollens storing methods， - 20 ℃ temperature drying and - 67 ℃ drying 1-3 h are the favorable methods for preserving pollen vitalities. [Conclusion] The study can provide feasible method for determination of Lilium brownie pollen vitality and pollen storage breeding.
Key wordsLilium brownii var. viridulum； Pollen； Vitalities； Storage
江西萬载有500多年食用百合种植的历史，是我国的三大百合基地之一，万载百合产品是历代贡品。江西龙牙百合公司的“龙牙百合”商标被认定为“江西省著名商标”，龙牙公司、千年公司的百合产品均获得“绿色食品”认证。目前龙牙百合产品已畅销日本、韩国、西欧等地，在国际国内享有盛誉，市场前景十分广阔。但目前万载龙牙百合生产上存在着栽培品种退化严重、病害发生严重等问题[1-2]，亟需培育优良百合新品种。
当前育成的百合新品种中，大部分采用常规杂交育种方法。在做杂交之前，熟悉掌握亲本花粉的生活力，是每个育种工作者的首要工作。许多学者对百合花粉生活力测定及贮藏方法进行了研究[3-4]，但是百合种类丰富，不同种和品种的百合花粉生活力测定及贮藏方法有所不同， 目前万载龙牙百合的花粉生活力测定方法及贮藏方法还未见报道。笔者采用醋酸洋红等方法对龙牙百合花粉生活力进行测定，拟选出适宜龙牙百合花粉生活力的测定方法；同时对保持花粉生活力的贮藏方法进行研究，以期为龙牙百合育种提供实用的花粉贮藏方法。
1材料与方法
1.1材料试验选用江西省万载县白水乡百合基地栽培的龙牙百合为供试材料。
1.2花粉生活力测定方法采用醋酸洋红法[5]、氯化三苯基四氮唑法（TTC法）、过氧化物酶测定法、碘-碘化钾法[3]测定龙牙百合花粉的生活力。
1.3花粉的贮藏方法采用常温贮藏、常温干燥贮藏、低温贮藏、低温干燥贮藏、超低温贮藏等11种贮藏方法进行对比试验，采用醋酸洋红法定期测定花粉的生活力。在龙牙百合开花时，选健壮植株的优质花朵，用镊子取花药，用硫酸纸将花药包好，分成适量等份。
1.3.1高温贮藏法。在37 ℃条件下，将39瓶花粉放入无干燥剂的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.2高温干燥贮藏法。在37 ℃条件下，将39瓶花粉放入有干燥剂（适量硅胶）的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.3常温贮藏法。在25 ℃左右条件下，将39瓶花粉放入无干燥剂的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.4常温干燥贮藏法。在25 ℃左右条件下，将39瓶花粉放入有干燥剂（适量硅胶）的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.5低温贮藏法。在5 ℃条件下，将39瓶花粉放入无干燥剂的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.6低温干燥贮藏法。在5 ℃条件下，将39瓶花粉放入有干燥剂（适量硅胶）的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.7-20 ℃贮藏法。在-20 ℃条件下，将39瓶花粉放入无干燥剂的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。
1.3.8-20 ℃干燥贮藏法。在-20 ℃条件下，将39瓶花粉放入有干燥剂（适量硅胶）的干燥器中贮存，瓶口用凡士林密封。 1.3.9超低温干燥贮藏法。用1.5 ml冻存管每管约装1/3管，放于干燥器内，以适量硅胶干燥不同时间（1、2、3 h）后，将冻存管放入液氮中，再放入-67 ℃的超低温冰箱存储。
1.4测定项目及时间贮藏的花粉生活力测定分别在第1天、第3天、第5天、第7天、第10天、第15天、第20天、第30天、第40天、第60天、第105天、第200天、第300天进行。
2结果与分析
2.1不同方法测定龙牙百合花粉生活力结果分析由表1可知，采用氯化三苯基四氮唑法、过氧化物酶测定法、碘-碘化钾法和醋酸洋红法4种方法测得龙牙百合花粉生活力差异有相似的趋势，其中醋酸洋红法方法较简便且染色易分
辨，效果较好。
2.2不同储藏方法对龙牙百合花粉生活力的影响采用醋酸洋红法测定花粉生活力，进行龙牙百合花粉贮藏方法的研究。由图1和表2可见，在所有的贮藏方法中，花粉的生活力随贮藏天数的增加而下降。其中干燥贮藏法優于非干燥贮藏法，低温贮藏优于常温贮藏处理，这与前人研究结果相符[3]；常温贮藏又优于高温贮藏处理，在-20 ℃贮藏法和-67 ℃干燥贮藏法试验中，-20 ℃干燥贮藏法明显优于前面7种贮藏法，超低温干燥1、2和3 h 贮藏法又明显优于-20 ℃干燥贮藏法，-20 ℃干燥贮藏法和超低温（-67 ℃）干燥1、2和3 h 贮藏法均可贮藏龙牙百合花粉300 d，能较好地解决百合花期不遇问题。
图1不同储藏方法对龙牙百合花粉生活力的影响
表2不同低温干燥方法贮藏龙牙百合花粉生活力情况%
处理时间第60天第105天第300天低温（5 ℃）干燥法22.2624.590.00-20 ℃干燥法59.2652.5350.90超低温干燥1 h法57.3362.4360.20超低温干燥2 h法81.3876.9273.59超低温干燥3 h法83.4475.2974.80
3讨论
在百合杂交育种过程中，杂交父本花粉的生活力是应该考虑的重要因素之一。试验结果表明，龙牙百合花粉生活力高；-20 ℃干燥法和-67 ℃干燥1～3 h均有利于保持百合花粉活力，-20 ℃干燥法和-67 ℃干燥1～3 h能否长久保存龙牙百合花粉活力，有待于进一步的研究。
参考文献
[1] 潘其辉，朱业斌，丁益清.万载县百合产业现状与发展对策[J].安徽农业科学， 2013，41（15）：6969-6970.
[2] 邹一平，晏文武，周 蓉.食用百合枯萎病综合防治研究[J].安徽农业科学， 2005， 33（12）：2294-2295.
[3] 赵兴华，张道旭，印东生，等.百合花粉生活力测定和贮藏方法研究[J].北方园艺， 2009（2）：172-175.
[4] 时婷婷，张桂玲，温四民，等.百合花粉超低温保存方法研究[J].北方园艺， 2013（3）：64-66.
[5] 周桂雪，李克虎，张线线，等.亚洲百合品种倍性、花粉育性及其杂交研究[J].园艺学报， 2011，38（4）：733-739.