番茄材料PI128216抗疮痂病T3小种基因Rx4启动子的克隆与分析

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抗病基因的启动子在黄单胞杆菌属(Xanthomonas)病原菌与寄主植物互作中起着重要的作用。番茄疮痂病是由黄单胞杆菌引起的一种严重威胁番茄生产的病害,已有研究表明,病原菌T3小种(X.perforans)与抗病基因Rx4的识别可能与该基因的启动子有关。因此,本研究采用PCR技术从醋栗番茄(Solanum pimpinellifolium)材料PI128216基因组DNA中克隆了Rx4上游2 149 bp的核苷酸序列。经与Plant Cis-acting Regulatory DNA Elements(PLACE)数据库对比发现,该序列中含有启动子基本核心作用元件,赤霉素、脱落酸、乙烯等激素诱导相关的顺式作用元件,干旱、盐胁迫、高低温等非生物胁迫相关的顺式作用元件,大量与病原菌诱发因子表达调节相关的转录因子WRKY和MYB结合的元件,以及抗性元件W-box、G-box等。将该启动子4个不同长度的缺失片段分别与GUS报告基因融合构成表达载体,利用农杆菌介导瞬时表达体系在番茄子叶与烟草(Nicotiana benthamiana)叶片中进行表达。GUS活性定量分析结果显示,仅有-338~-41之间297 bp片段活性很弱,其余3个片段-552~-41之间511 bp片段、-1285~-41之间1 244 bp片段和-1 285~-552之间733 bp片段的活性依次增强,但差异不明显。因此,-1285~-338之间的区域对Rx4基因的启动子活性有重要作用。这一发现为进一步研究该启动子类型以及Rx4与番茄疮痂病病原菌T3小种的互作提供了参考。
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