【摘 要】
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目的:探讨S100A6经由巨噬细胞介导的促血管生成作用及机制。方法:（1）用重组蛋白GST-hS100A6处理巨噬细胞后:①收集上清制备条件培养基（简称A6-Mφ-CM）,并用之重悬人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用体外血管形成试验检测各处理因素对血管形成的影响;②分别用实时荧光定量PCR和Western blot检测巨噬细胞的M2型标志物CD163及促血管形成因子CCL2、IL-6、VEGFA的
【机 构】
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重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室
【基金项目】
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重庆市渝中区科技计划（基础与前沿研究）（20160106）资助项目；
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目的:探讨S100A6经由巨噬细胞介导的促血管生成作用及机制。方法:（1）用重组蛋白GST-hS100A6处理巨噬细胞后:①收集上清制备条件培养基（简称A6-Mφ-CM）,并用之重悬人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用体外血管形成试验检测各处理因素对血管形成的影响;②分别用实时荧光定量PCR和Western blot检测巨噬细胞的M2型标志物CD163及促血管形成因子CCL2、IL-6、VEGFA的mRNA和蛋白质水平,以及JAK2和STAT3的蛋白质及其磷酸化水平;③用Transwell迁移试验检测巨噬细胞迁移能力的变化。（2）使用JAK2抑制剂（XL019）预处理巨噬细胞后再加GST-hS100A6处理,检测S100A6促巨噬细胞迁移作用的变化。以重组蛋白GST为实验对照。结果:（1） A6-Mφ-CM组的血管分支数和血管分支长度既明显高于GST-Mφ-CM组（P值均小于0.05）,也明显高于GST-hS100A6直接处理的HUVEC组（P <0.001,P <0.01）,提示S100A6处理后的巨噬细胞具有促进血管形成的作用;（2） GST-hS100A6处理后的巨噬细胞中,CD163、CCL2、IL-6、VEGFA的mRNA和蛋白质水平明显高于GST组（P值均小于0.05）,提示S100A6诱导巨噬细胞向促血管表型（pro-angiogenic phenotype）转化;（3） GST-hS100A6处理后,巨噬细胞的迁移数是GST组的1.4倍（P <0.01）,提示S100A6具有招募巨噬细胞的作用;（4） GST-hS100A6处理组巨噬细胞的JAK2和STAT3的蛋白质及其磷酸化水平都明显高于GST组（P值均小于0.05）,而JAK2抑制剂XL019可部分抑制S100A6促进巨噬细胞迁移的作用（P <0.01）,提示S100A6促进巨噬细胞迁移作用机制涉及JAK2/STAT3信号通路的激活。结论:微环境中的S100A6可通过招募巨噬细胞并进一步诱导其向促血管表型转化,进而促进新生血管形成;其招募巨噬细胞的机制涉及JAK2/STAT3信号通路的激活。
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