【摘 要】
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目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pEGFP-N1-FUT4真核表达载体.方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶IV(FUT4)全长基因,克隆至pEGFP-N1-FUT4表达载体并进行鉴
【机 构】
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大连医科大学生化与分子生物学教研室,大连医科大学生化与分子生物学教研室,大连医科大学生化与分子生物学教研室,大连医科大学生化与分子生物学教研室 辽宁省大连市116044,辽宁省大连市116044,辽宁
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目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pEGFP-N1-FUT4真核表达载体.方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶IV(FUT4)全长基因,克隆至pEGFP-N1-FUT4表达载体并进行鉴定.通过脂质体转染到人表皮癌细胞系A431中,荧光显微镜下观察并经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测FUT4的表达.结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT4基因,FUT4基因正确插入pEGFP-N1中,在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白在A431细胞中的表达,RT-PCR和Western blot检测结果显示FUT4的表达明显增加.结论:成功构建绿色荧光蛋白为报告基因的FUT4真核表达载体,并检测到在A431细胞中的表达.
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