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【目的】建立一种简便、快速、实用的大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）体外分离、纯化和扩增的方法。【方法】采用贴壁法分离纯化大鼠骨髓MSCs（rMSCs），并对其形态学特征进行观察，培养时观察条件培养基对rMSCs生长的影响。【结果】贴壁法能有效地分离rMSCs，采用条件培养液培养，细胞活力好，增殖能力强，对维持细胞正常形态有着重要作用。【结论】贴壁分离法能成功地进行rMSCs的体外分离，采用条件培养液建立的rMSC。培养方法有效可行。