【摘 要】
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针对牛冠状病毒（BCoV）N基因保守序列设计合成了1对特异性引物,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了检测BCoV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。在1个反应体系中模板最
【机 构】
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山东省农业科学院奶牛研究中心,山东师范大学生命科学学院,东北农业大学生命科学学院
【基金项目】
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现代农业(奶牛)产业技术体系科学家岗位(Cars-37);泰山学者海外特聘专家(tshw20100417);国家自然科学基金(31272586,31302095);山东省农业重大应用技术创新课题;兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金(SKLVBF201510);山东省农业科学院科技创新重点项目(2014CXZ08)子课题(2014CXZ-08-3);山东省农业科学院重大成果培育项目(2015
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针对牛冠状病毒（BCoV）N基因保守序列设计合成了1对特异性引物,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了检测BCoV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。在1个反应体系中模板最低检测限为7.8 copies/μL,比普通RT-PCR更加灵敏;与牛主要消化道和呼吸道病毒病病原均无交叉反应;批内、批间重复变异系数均低于1.5%;应用定量PCR检测了39份疑似临床病料,阳性检出率为51.28%（20/39）,普通RT-PCR为41.03%（16/39）。结果表明,该方法特异性强、稳定性好、准确
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