【摘 要】
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PCR技术被广泛应用于副溶血弧菌的检测中,但传统的PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,往往使检测结果出现较高的假阳性。因此,将叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bro-mid
【机 构】
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汕头大学生物系; 中国科学院南海海洋研究所;
【基金项目】
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广东省科技计划项目(No.2006B20501008,2009B020309007);广东省海洋渔业科技推广项目(No.A200901H06)
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PCR技术被广泛应用于副溶血弧菌的检测中,但传统的PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,往往使检测结果出现较高的假阳性。因此,将叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bro-mide,EMA)与PCR技术结合,建立一种快速、准确的副溶血弧菌检测方法。以dnaJ基因为检测副溶血弧菌的靶基因,分别用副溶血弧菌的纯培养细胞及其基因组DNA作模板进行PCR检测,灵敏度分别为2.5×104 CFU/mL和6×102 fg/μL。在检测样品前处理过程中加入EMA,当EMA的浓度小于5 mg/L时,EMA对活菌靶基因的扩增没有明显的抑制;而终浓度为2 mg/L的EMA,能有效抑制1×108 CFU/mL副溶血弧菌死菌的扩增。活菌和死菌混合体系的PCR结果表明,EMA-PCR能有效降低副溶血弧菌检测过程中的假阳性。
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