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[摘要] 目的 探讨血清白细胞介素10（IL-10）水平与先兆流产的关系，及其在判断先兆流产治疗效果中的临床应用价值。 方法 采用酶联免疫吸附双抗体夹心法（ELISA）检测56例先兆流产患者（先兆流产组）、30例正常早期妊娠妇女（对照组），以及44例保胎成功患者（保胎成功组）、12例保胎失败患者（保胎失败组）血清中IL-10水平。 结果 （1）先兆流产组血清IL-10水平明显低于对照组（P<0.01）；（2）治疗前，保胎成功组和保胎失败组血清IL-10水平明显低于对照组（P<0.01），而保胎成功组与保胎失败组治疗前血清IL-10水平比较，两组间差异无统计学意义（P>0.05）；（3）先兆流产患者保胎成功组治疗后血清IL-10水平明显升高，与治疗前比较，差异有统计学意义（P<0.01），与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 先兆流产患者血清IL-10水平明显降低，可作为判断先兆流产治疗效果的参考指标。
[关键词] 白细胞介素10；先兆流产
[中图分类号] R714.21 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）17-33-03
白细胞介素10（Interleukin-10，IL-10）促进胎儿组织非典型HLA Ⅰ类和Ⅱ类分子的表达，抑制APC对抗原递呈或与T细胞共刺激信号的产生，IL-10又称“细胞因子合成抑制因子”，抑制TH1型细胞因子的产生。
对于无严重的胚胎缺陷的先兆流产患者，进行相应的治疗是非常必要的。传统的诊疗方法存在一定的局限性，不能准确评估保胎治疗的效果[1-4]。因此，提高先兆流产预后的预测准确性和保胎成功率更显重要。本研究采用ELISA法检测先兆流产患者保胎治疗前后血清IL-10水平的变化情况，探讨其在先兆流产发生和发展中的作用，以及在判断先兆流产治疗效果中的临床应用价值，为临床研制有效的免疫制剂提供一定的理论基础。
1 对象与方法
1.1 研究对象
2010年9月～2011年8月因流产征象而入住包头市中心医院妇产科的56例先兆流产患者作为先兆流产组，年龄（26.8±4.7）岁，孕龄（8.5±4.1）周，有少量阴道流血，经血hCG及B超检查确诊为先兆流产。入院后经常规保胎治疗（如补充hCG、黄体酮、卧床休息等），以妊娠满28周，未出现流产征象视为保胎成功，其中44例因保胎治疗成功而继续妊娠者作为保胎成功组，12例保胎治疗失败者（包括4例难免流产和8例胚胎停止发育）行清宫术，作为保胎失败组。对照组选取在包头市中心医院妇产科门诊行人工流产的30例健康的早期妊娠妇女，年龄（25.8±4.9）岁，孕周（9.2±3.6）周。两组妇女在年龄、孕周等方面差异无统计学意义（P>0.05），入组病例均无全身感染，无生殖器官畸形，夫妇双方染色体检查均无异常。
1.2 研究方法
所有研究对象均在早晨空腹抽取肘正中静脉血3mL，取血1h内，2000rpm离心10min，留取上清液（血清），每人份分装2管，冻存于-20℃冰箱，待集中检测，IL-10酶联免疫吸附测定试剂盒购自上海联硕生物科技有限公司。用酶标仪在492nm处测吸光度值。保胎失败组和对照组在施行清宫术时，收集绒毛和蜕膜组织，Bouin液固定，石蜡包埋法制备组织切片，行常规H-E染色，在光学显微镜下观察绒毛及蜕膜组织的形态学变化。
1.3 结果判定及统计学处理
以标准品所对应的浓度作为纵坐标，OD值作为横坐标，在半对数纸上画出标准曲线。根据样品OD值在该标准曲线图上查出相应样品中IL-10的含量。所有数据采用SPSS11.5软件分析处理，用（）表示，IL-10浓度经方差齐性检验后，两组均数比较采用t检验；多组均数比较，用单因素方差分析（one-way ANOVA）中的LSD法处理，并进行组间两两比较，P<0.05为差异有统计学意义。
2 ELISA结果
2.1 先兆流产患者与正常早期妊娠妇女比较
先兆流产组血清中IL-10水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。
2.2 先兆流产保胎治疗前与正常早期妊娠妇女相比
治疗前，保胎成功组和保胎失败组血清IL-10水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.01），而保胎成功组与保胎失败组治疗前血清IL-10水平比较，两组间差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。
2.3 保胎成功组治疗前后比较
先兆流产患者保胎成功组治疗后血清IL-10水平明显升高，与治疗前比较，差异有统计学意义（P<0.01），与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。
2.4 HE染色光镜观察
在绒毛组织中，先兆流产保胎失败组的滋养层变薄，细胞变性、坏死，嗜酸性增强，绒毛中轴纤维化程度增加（图1A）；对照组绒毛上皮细胞滋养层和合体滋养层细胞清晰可见，绒毛中轴结缔组织细胞结构正常（图1B）。在蜕膜组织中，先兆流产保胎失败组蜕膜细胞失去细胞间连接，细胞嗜酸性增强（图1C）；对照组蜕膜细胞的细胞质染色浅，细胞界限清楚，细胞排列紧密（图1D）。
3 讨论
近年研究表明，免疫平衡与先兆流产有很大关系，TH1/TH2免疫平衡是妊娠免疫的重要内容。TH1/TH2平衡破坏可能会导致妊娠病理的产生。IL-10是由蜕膜NK细胞分泌的TH2型细胞因子之一，能通过增强体外培养的滋养细胞中人白细胞抗原（HLA）-C mRNA的稳定性而增加HLA-C在滋养细胞表面的表达，有利于妊娠的维持[5-7]。国内外学者研究发现，反复自然流产患者血清中IL - 10的水平降低，推测IL - 10与反复自然流产有关[8-11]，但尚无人用IL-10来预测先兆流产的临床治疗效果。本研究先兆流产患者治疗前血清IL-10水平明显低于对照组；56例先兆流产患者中44例保胎成功，保胎成功后血清IL-10水平显著高于治疗前；12例保胎失败者保胎治疗前血清IL-10水平明显低于对照组，而与先兆流产患者中保胎成功者治疗前水平比较，IL-10水平有降低倾向，但无显著性差异。上述实验结果表明IL-10与先兆流产保胎成功率关系密切，保胎成功者可能与保胎措施纠正了IL-10水平异常降低有一定关系，而保胎失败者可能与常规治疗措施不可纠正的致流产因素如遗传基因缺陷、遗传免疫功能异常等有关。 绒毛滋养层是为胚胎发育提供营养物质的重要结构，滋养层变薄或滋养层细胞坏死退化势必会导致胚胎营养物质的缺乏，影响胚胎的生长发育，严重的就会导致流产的发生。绒毛中轴是由胚外中胚层形成，内有血管，它也是胚胎发育早期营养物质交换的重要结构，如果发生纤维化同样会影响胚胎的发育。蜕膜组织的炎性破坏，可能和患者血清IL-10水平的降低有关，从而趋化和激活中性粒细胞以及T淋巴细胞，在蜕膜组织中引起炎性反应，蜕膜细胞变性、坏死，胚胎发育的正常环境受到破坏，导致流产的发生。
本研究测定的先兆流产患者血清IL-10存在明显异常：先兆流产患者IL-10明显下降，正常妊娠时则相反。血清IL-10的表达与妊娠关系密切，可以作为判断先兆流产预后的参考指标。由于细胞因子之间及其与生殖过程之间的相互作用十分复杂[12]，故要了解细胞因子与流产之间的作用机制，尚需进行更复杂、更深入的研究。
[参考文献]
[1] Lin H，Mosmann TR，Guilbert L，et al. Synthesis of T helper 2 type cytokines at the maternal-fetal interface [J].J Immunol，1993，151（9）：4562-4573.
[2] Marzi M，Vigano A，Trabattoni D，et al. Characterization of type 1 and type 2 cytokine production profile in physiologic and pathologic human pregnancy[J].Clin Exp Immunol，1996，106（1）：127-133.
[3] Raghupathy R.Th1-immunity is incompatible with successful pregnancy[J].Immunol Today，1997，18（10）：478-482.
[4] Calleja-Agius J，Schembri-Wismayer P，Calleja N，et al. Obstetric outcome and cytokine levels in threatened miscarriage[J].Gynecol Endocrinol，2011，27（2）：121-127.
[5] 杨秋红，沈双双，李红儿.白细胞介素-10 592C/A基因多态性与原因不明复发性流产的关系[J].实用妇产科杂志，2010，26（9）：705-707.
[6] Calleja-Agius J，Jauniaux E，Muttukrishna S.Inflammatory cytokines in maternal circulation and placenta of chromosomally abnormal first trimester miscarriages[J].Clin Dev Immunol，2012，2012：175041.
[7] Parveen F，Shukla A，Agarwal S. Cytokine gene polymorphisms in northern Indian women with recurrent miscarriages[J]. Fertil Steril，2013，99（2）：433-440.
[8] 于爱莲，张丰雪，杨春贵，等.反复自然流产与白细胞介素关系的研究[J].中国实用妇科与产科杂志，2000，16（4）：227-229.
[9] Piccinni MP，Beloni L，Livi C，et al. Defective production of both leukemia inhibitory factor and type 2 T-helper cytokines by decidual T cells in unexplained recurrent abortions[J].NatMed，1998，4（9）：1020-1024.
[10] 闫华，刘慈，杨素娟，等. 原因不明反复自然流产患者主动免疫治疗前后血清白细胞介素-10、巨噬细胞集落刺激因子、白血病抑制因子浓度的变化[J].生殖医学杂志， 2006，15（1）：22-25.
[11] Liu F，Luo SP.Effect of Chinese herbal treatment on Th1- and Th2-type cytokines， progesterone and beta-human chorionic gonadotropin in early pregnant women of threatened abortion[J].Chin J Integr Med，2009，15（5）：353-358.
[12] Calleja-Agius J，Jauniaux E，Muttukrishna S. Placental villous expression of TNFα and IL-10 and effect of oxygen tension in euploid early pregnancy failure[J].Am J Reprod Immunol，2012，67（6）：515-525.
（收稿日期：2013-05-23）
[关键词] 白细胞介素10；先兆流产
[中图分类号] R714.21 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）17-33-03
白细胞介素10（Interleukin-10，IL-10）促进胎儿组织非典型HLA Ⅰ类和Ⅱ类分子的表达，抑制APC对抗原递呈或与T细胞共刺激信号的产生，IL-10又称“细胞因子合成抑制因子”，抑制TH1型细胞因子的产生。
对于无严重的胚胎缺陷的先兆流产患者，进行相应的治疗是非常必要的。传统的诊疗方法存在一定的局限性，不能准确评估保胎治疗的效果[1-4]。因此，提高先兆流产预后的预测准确性和保胎成功率更显重要。本研究采用ELISA法检测先兆流产患者保胎治疗前后血清IL-10水平的变化情况，探讨其在先兆流产发生和发展中的作用，以及在判断先兆流产治疗效果中的临床应用价值，为临床研制有效的免疫制剂提供一定的理论基础。
1 对象与方法
1.1 研究对象
2010年9月～2011年8月因流产征象而入住包头市中心医院妇产科的56例先兆流产患者作为先兆流产组，年龄（26.8±4.7）岁，孕龄（8.5±4.1）周，有少量阴道流血，经血hCG及B超检查确诊为先兆流产。入院后经常规保胎治疗（如补充hCG、黄体酮、卧床休息等），以妊娠满28周，未出现流产征象视为保胎成功，其中44例因保胎治疗成功而继续妊娠者作为保胎成功组，12例保胎治疗失败者（包括4例难免流产和8例胚胎停止发育）行清宫术，作为保胎失败组。对照组选取在包头市中心医院妇产科门诊行人工流产的30例健康的早期妊娠妇女，年龄（25.8±4.9）岁，孕周（9.2±3.6）周。两组妇女在年龄、孕周等方面差异无统计学意义（P>0.05），入组病例均无全身感染，无生殖器官畸形，夫妇双方染色体检查均无异常。
1.2 研究方法
所有研究对象均在早晨空腹抽取肘正中静脉血3mL，取血1h内，2000rpm离心10min，留取上清液（血清），每人份分装2管，冻存于-20℃冰箱，待集中检测，IL-10酶联免疫吸附测定试剂盒购自上海联硕生物科技有限公司。用酶标仪在492nm处测吸光度值。保胎失败组和对照组在施行清宫术时，收集绒毛和蜕膜组织，Bouin液固定，石蜡包埋法制备组织切片，行常规H-E染色，在光学显微镜下观察绒毛及蜕膜组织的形态学变化。
1.3 结果判定及统计学处理
以标准品所对应的浓度作为纵坐标，OD值作为横坐标，在半对数纸上画出标准曲线。根据样品OD值在该标准曲线图上查出相应样品中IL-10的含量。所有数据采用SPSS11.5软件分析处理，用（）表示，IL-10浓度经方差齐性检验后，两组均数比较采用t检验；多组均数比较，用单因素方差分析（one-way ANOVA）中的LSD法处理，并进行组间两两比较，P<0.05为差异有统计学意义。
2 ELISA结果
2.1 先兆流产患者与正常早期妊娠妇女比较
先兆流产组血清中IL-10水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。
2.2 先兆流产保胎治疗前与正常早期妊娠妇女相比
治疗前，保胎成功组和保胎失败组血清IL-10水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.01），而保胎成功组与保胎失败组治疗前血清IL-10水平比较，两组间差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。
2.3 保胎成功组治疗前后比较
先兆流产患者保胎成功组治疗后血清IL-10水平明显升高，与治疗前比较，差异有统计学意义（P<0.01），与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。
2.4 HE染色光镜观察
在绒毛组织中，先兆流产保胎失败组的滋养层变薄，细胞变性、坏死，嗜酸性增强，绒毛中轴纤维化程度增加（图1A）；对照组绒毛上皮细胞滋养层和合体滋养层细胞清晰可见，绒毛中轴结缔组织细胞结构正常（图1B）。在蜕膜组织中，先兆流产保胎失败组蜕膜细胞失去细胞间连接，细胞嗜酸性增强（图1C）；对照组蜕膜细胞的细胞质染色浅，细胞界限清楚，细胞排列紧密（图1D）。
3 讨论
近年研究表明，免疫平衡与先兆流产有很大关系，TH1/TH2免疫平衡是妊娠免疫的重要内容。TH1/TH2平衡破坏可能会导致妊娠病理的产生。IL-10是由蜕膜NK细胞分泌的TH2型细胞因子之一，能通过增强体外培养的滋养细胞中人白细胞抗原（HLA）-C mRNA的稳定性而增加HLA-C在滋养细胞表面的表达，有利于妊娠的维持[5-7]。国内外学者研究发现，反复自然流产患者血清中IL - 10的水平降低，推测IL - 10与反复自然流产有关[8-11]，但尚无人用IL-10来预测先兆流产的临床治疗效果。本研究先兆流产患者治疗前血清IL-10水平明显低于对照组；56例先兆流产患者中44例保胎成功，保胎成功后血清IL-10水平显著高于治疗前；12例保胎失败者保胎治疗前血清IL-10水平明显低于对照组，而与先兆流产患者中保胎成功者治疗前水平比较，IL-10水平有降低倾向，但无显著性差异。上述实验结果表明IL-10与先兆流产保胎成功率关系密切，保胎成功者可能与保胎措施纠正了IL-10水平异常降低有一定关系，而保胎失败者可能与常规治疗措施不可纠正的致流产因素如遗传基因缺陷、遗传免疫功能异常等有关。 绒毛滋养层是为胚胎发育提供营养物质的重要结构，滋养层变薄或滋养层细胞坏死退化势必会导致胚胎营养物质的缺乏，影响胚胎的生长发育，严重的就会导致流产的发生。绒毛中轴是由胚外中胚层形成，内有血管，它也是胚胎发育早期营养物质交换的重要结构，如果发生纤维化同样会影响胚胎的发育。蜕膜组织的炎性破坏，可能和患者血清IL-10水平的降低有关，从而趋化和激活中性粒细胞以及T淋巴细胞，在蜕膜组织中引起炎性反应，蜕膜细胞变性、坏死，胚胎发育的正常环境受到破坏，导致流产的发生。
本研究测定的先兆流产患者血清IL-10存在明显异常：先兆流产患者IL-10明显下降，正常妊娠时则相反。血清IL-10的表达与妊娠关系密切，可以作为判断先兆流产预后的参考指标。由于细胞因子之间及其与生殖过程之间的相互作用十分复杂[12]，故要了解细胞因子与流产之间的作用机制，尚需进行更复杂、更深入的研究。
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[7] Parveen F，Shukla A，Agarwal S. Cytokine gene polymorphisms in northern Indian women with recurrent miscarriages[J]. Fertil Steril，2013，99（2）：433-440.
[8] 于爱莲，张丰雪，杨春贵，等.反复自然流产与白细胞介素关系的研究[J].中国实用妇科与产科杂志，2000，16（4）：227-229.
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[10] 闫华，刘慈，杨素娟，等. 原因不明反复自然流产患者主动免疫治疗前后血清白细胞介素-10、巨噬细胞集落刺激因子、白血病抑制因子浓度的变化[J].生殖医学杂志， 2006，15（1）：22-25.
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[12] Calleja-Agius J，Jauniaux E，Muttukrishna S. Placental villous expression of TNFα and IL-10 and effect of oxygen tension in euploid early pregnancy failure[J].Am J Reprod Immunol，2012，67（6）：515-525.
（收稿日期：2013-05-23）