【摘 要】
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CYP26B1是调节体内视黄酸(retinoic acid,RA)水平的一个关键酶,广泛存在于哺乳动物器官和组织中,对软骨细胞的分化具有重要的调节作用。本试验参照NCBI GenBank中已发表的牛C
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31472158,31372390,31672503)
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CYP26B1是调节体内视黄酸(retinoic acid,RA)水平的一个关键酶,广泛存在于哺乳动物器官和组织中,对软骨细胞的分化具有重要的调节作用。本试验参照NCBI GenBank中已发表的牛CYP26B1基因序列,设计特异性引物。利用PCR方法扩增CYP26B1基因的编码区,并与pGEM-T载体连接,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与pcDNA3.1载体融合得到CYP26B1过表达重组质粒。经测序鉴定后,转染鹿茸软骨细胞,利用实时荧光定量PCR方法检测CYP26B1mRNA表达变化。应用MEGA软件的Test Neighbor-Joining Tree法绘制CYP26B1基因系统进化树并进行比对分析。结果显示,重组质粒pcDNA3.1-CYP26B1转染鹿茸软骨细胞后,CYP26B1的表达量显著升高(P<0.05)。进化树分析结果表明,梅花鹿CYP26B1基因与牛的基因同源性最高。本研究成功构建了梅花鹿CYP26B1过表达载体,为进一步研究CYP26B1在鹿茸生长及再生中的作用奠定基础。
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