【摘 要】
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目的建立一个可靠的、可供临床应用检测的r AAV2-KAL残余HEK293细胞宿主蛋白（host cell protein,HCP）的测试方法。方法 Western blot方法鉴定r AAV,ELISA方法确定最佳线性范围
【机 构】
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华侨大学分子药物研究院,九江学院基础医学院,分子药物学教育部工程中心,
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目的建立一个可靠的、可供临床应用检测的r AAV2-KAL残余HEK293细胞宿主蛋白（host cell protein,HCP）的测试方法。方法 Western blot方法鉴定r AAV,ELISA方法确定最佳线性范围及最低检测限,验证准确度及精密度。本实验连续生产并用二次氯化铯纯化3批r AAV2-KAL,使用ELISA方法检测r AAV2-KAL所含有的HCP含量,验证超速离心纯化工艺中的适用性。结果建立的ELSA方法的最佳线性范围为4200 ng·m L-1,最低检测为4 ng·mL-1;不同浓度的HEK293细胞蛋白抗原回收率77.0%115.0%,准确度较好;变异系数为8.2%15.4%均低于20%,显示准确度和精密度均良好;制备的3批r AAV2-KAL经过二次Cs Cl纯化后,HCP含量均低于100 ng·mL-1,显示该纯化工艺可有效去除HCP。结论本实验成功建立HEK293细胞残余蛋白含量检测的双抗体夹心法ELSA方法,可用于r AAV病毒载体中HEK293宿主细胞蛋白残余含量的检测。
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