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目的
利用噬菌体展示随机12肽库筛选生殖支原体黏附蛋白(MgPa)的特异结合多肽,以了解MgPa的生物学功能及其可能的致病机制。
方法以纯化的重组生殖支原体黏附蛋白(rMgPa)为靶分子,对噬菌体展示随机12肽库进行3轮生物淘选,收集淘选后的噬菌体进行扩增培养,利用碘化钠法提取其单链DNA进行测序分析。用ELISA、竞争性结合试验和斑点免疫印迹试验检测阳性噬菌体与rMgPa结合的特异性。
结果进行3轮生物淘选后,噬菌体克隆有明显富集。随机挑取的38个噬菌体克隆中,共出现11种不同的外源性多肽序列(P1~P11)。根据11条多肽序列中氨基酸出现的重复次数,推导出两条核心序列,即:V-H-W-D-F-R-Q-W-W-Q-P-S和D-W-S-S-W-V-H/Y-R-D-P-Q-T/S。ELISA、竞争性结合试验和斑点免疫印迹试验的结果表明:11个代表性克隆中,有10个(P1~P10)能与rMgPa发生特异结合。
结论成功筛选到了能与rMgPa发生特异结合的2条多肽,为了解MgPa的生物学功能,从而进一步了解Mg可能的致病机制提供前期实验基础。