利用环介导等温扩增技术快速检测肠出血性大肠杆菌及其毒素的方法建立和评价

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目的

针对编码大肠杆菌志贺毒素由位于STEC染色体上的前噬菌体携带的stx基因和O157抗原编码基因rfbe设计特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,建立一种针对肠出血性大肠杆菌及其毒素的环介导等温扩增(LAMP)反应技术检测法。

方法

通过优化LAMP反应的各影响因素,确定LAMP反应体系和反应条件并利用已优化的LAMP体系进行相关检测。

结果

确定LAMP反应体系为:内引物(FIP、BIP)与外引物(F3、B3)的比例为8∶1,Mg2+浓度10 mmol/L,dNTPs浓度1.2 mmol/L,甜菜碱浓度0.4 mol/L,Bst DNA聚合酶的添加量为1 μl。LAMP反应时间为60 min,反应温度为60 ℃。以PCR法作为对照,LAMP检测的敏感度为5×101 CFU/mL,PCR的敏感度为5×104 CFU/mL。同时,研究应用所建立的LAMP快速检测法对部分革兰阳性和阴性菌及102株O157大肠杆菌进行快速检测。结果显示,检测特异度达100%,O157大肠杆菌rfbe检出率为100%(102/102),stx1检出率为95.2%(59/62),stx2检出率为92.9%(52/56)。

结论

成功建立了一种可应用于肠出血性大肠杆菌及其毒素的敏感、特异的LAMP检测方法。

其他文献
目的研究谷氨酰胺(Gln)代谢与鼻咽癌放疗抵抗的关系及作用机制。方法采用慢病毒感染技术建立肾型谷氨酰胺酶(GLS1)敲低的人鼻咽癌细胞系CNE1、6-10B及对照细胞系,脂质体转染技术建立GLS1过表达的人鼻咽癌细胞系CNE2及对照细胞系;采用谷氨酰胺酶抑制剂BPTES抑制GLS1的活性;采用Gln/Glu及Glu检测试剂盒检测细胞Gln代谢情况;体外放射克隆形成实验及流式检测细胞凋亡实验检测Gl
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